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细胞外囊泡保存稳定剂
EV-Save™ 细胞外囊泡保存稳定剂
EV-Save™ 细胞外囊泡保存稳定剂，可保护细胞外囊泡免受冷冻损伤，以及抑制细胞外囊泡对样品管和枪头等实验耗材的吸附。FUJIFILM Wako还推出了适用于动物体内实验的版本（动物体内实验用）。
使用MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS（产品编号：299-77603, 293-77601）从细胞培养上清中提取外泌体时，搭配本品效果更佳。
冷冻保护
反复冻融会使外泌体受损。但储存前在含细胞外囊泡的试管中添加EV-Save™，即可在-80°C下储存细胞外囊泡。
防吸附
在纯化或储存前，往样品中添加EV-Save™，可防止由于实验和储存过程中发生的细胞外囊泡吸附而造成的损失，提高回收率。
■ 使用前
· 本产品用于血清、血浆或杂质较多的样品时，难以获得理想的防吸附效果。
· EV-Save™（动物体内实验用）（产品编号：050-09461）无法减少因超滤导致的细胞外囊泡损耗。因此，进行超滤时，请选用EV-Save™（超滤
· 用）（产品编号：058-09261）。
· EV-Save™（超滤用）（产品编号：058-09261）含有聚合物。若聚合物会影响后续的实验结果，请勿使用本产品。
◆特点
● 保护细胞外囊泡免受冷冻伤害
可在-80°C下储存细胞外囊泡
● 防止细胞外囊泡在培养上清中和纯化后对实验耗材的吸附
细胞外囊泡回收率提升！
● 操作简单，只需往样品中添加本产品即可
◆使用方法
＜使用MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2（产品编号：290-84103）从细胞培养上清中分离细胞外囊泡）
1. EV-Save™（超滤用）或EV-Save™（动物体内实验用）以1:100的终浓度添加到到细胞培养上清中，上下颠倒混合或轻敲混合。
2. 按照MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2（V2.0试剂盒）的说明书，执行实验操作至“5. 清洗细胞外囊泡结合磁珠”。
3. EV-Save™（超滤用）或EV-Save™（动物体内实验用）以1:100的终浓度添加到V2.0试剂盒配备的Exosome Elution Buffer中，上下颠倒混合或
3. 轻敲混合。
4. 按照V2.0试剂盒的说明书，继续执行实验操作至“6. 洗脱细胞外囊泡”，进行洗脱细胞外囊泡操作。
5. 存储洗脱后的细胞外囊泡※1，或继续进行下一实验操作。
<使用其他分离方法从细胞培养上清中分离细胞外囊泡>
1. EV-Save™（超滤用）或EV-Save™（动物体内实验用）以1:100的终浓度添加到细胞培养上清中，上下颠倒混合或轻敲混合。
2. EV-Save™（超滤用）或EV-Save™（动物体内实验用）以1:100的终浓度添加到分离得到的细胞外囊泡中，上下颠倒混合或轻敲混合。
3. 储存细胞外囊泡※1，或继续进行下一实验操作。
＜使用MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2从血清、血浆中分离细胞外囊泡>
1. 按照MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2（V2.0试剂盒）的说明书，执行实验操作至“5. 清洗细胞外囊泡结合磁珠”。
2. EV-Save™（超滤用）或EV-Save™（动物体内实验用）以1:100的终浓度添加到V2.0试剂盒配备的Exosome Elution Buffer中，上下颠倒混合或
3. 轻敲混合。
3. 按照V2.0试剂盒的说明书，继续执行实验操作至“6. 洗脱细胞外囊泡”，进行洗脱细胞外囊泡操作。
4. 存储洗脱后的细胞外囊泡※1，或继续进行下一实验操作。
※1 添加本产品后可在-20°C下冻存。注意避免反复冻融。
◆EV-Save™ 细胞外囊泡保存稳定剂（超滤用）
■ 细胞外泌体冷冻保护效果
众所周知，在反复冻融的条件下外泌体会受到损伤1）。下面就来验证添加EV-Save™ 是否能抑制外泌体所受到的损伤。
实验条件
对PS亲和法※2 对应试剂盒纯化得到的COLO201细胞来源外泌体进行冻融。然后，使用PS Capture™ Exosome ELISA Kit （Anti Mouse IgG POD)（产品编号：297-79201）进行检测（A），以及使用透射电子显微镜（TEM）进行分析（B）。
※2 利用磷脂酰丝氨酸（PS）结合分子以金属离子依赖性方式捕获细胞外囊泡后，用螯合剂洗脱的方法。通过MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2，可利用此方法纯化EV。
冻融后CD63信号减弱，但是添加 EV-Save™（超滤用）后这种减弱的情况得到抑制 （图A）。此外，电子显微镜分析结果表明冻融导致了粒子数明显减少，但是添加EV-Save™ （超滤用）可以起到抑制粒子数减少的作用（图B）。
参考文献
1）Steffi, B. et al. "Trehalose prevents aggregation of exosomes and cryodamage", Scientific Reports, 6, 36162 (2016).
■ EV-Save™（超滤用）的吸附抑制效果~样本管~
下面来验证一下，使用EV-Save™（超滤用） 是否能抑制提取外囊泡对试管的吸附。
实验条件
用MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS（产品编号：293-77601）从COLO201细胞的培养上清中提取出外泌体。
将3 ng/µL外泌体放入试管中静置3分钟。然后用移液器转移到其他样本管，重复本步骤4次以上。
在含EV-Save™（超滤用） 的实验组中，将EV-Save™（超滤用） 按照1/100体积添加到样本中，然后进行移液。
使用PS Capture™ 外泌体ELISA试剂盒（抗小鼠IgG POD）（产品编号：297-79201）对外泌体的CD63信号进行定量，验证移液次数与外泌体减少比率的关系。
将移液前的CD63信号设定为100%，相对值见图表。
【结果】
在普通样本管和低蛋白吸附样本管中，移液操作都会引起外泌体减少。而添加EV-Save™ 几乎能完全抑制移液引起的外泌体损耗。
■ EV-Save™ （超滤用）的吸附抑制效果~同时使用MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS~
下面，在利用MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS从TIG3细胞培养上清中提取外泌体的过程中，验证添加EV-Save™ （超滤用）是否能抑制外泌体的损耗。
实验条件
使用MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS，分别从1 mL COLO201、TIG3和人iPS细胞的培养上清中提取外泌体，培养上清没有经过超滤浓缩。
提取外泌体时分别进行了以下两项操作，"往各个培养上清中添加/不添加EV-Save™（超滤用）"，"往MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS附带的'Exosome Elution Buffer'中添加/不添加EV-Save™（超滤用）"。
使用PS Capture™ 外泌体ELISA试剂盒（抗小鼠IgG POD）（产品编号： 297-79201）对外泌体的CD63信号进行定量，并将其信号强度作为反应为外泌体量的标记。
假设移液前的CD63信号为100%，相对值见图表。
－/－: 培养上清没有添加EV-Save™（超滤用）/ "Exosome Elution Buffer"没有添加EV-Save™（超滤用）
－/＋: 培养上清没有添加EV-Save™（超滤用）/ "Exosome Elution Buffer"添加了EV-Save™（超滤用）
＋/＋: 培养上清添加了EV-Save™（超滤用）/ "Exosome Elution Buffer"添加了EV-Save™（超滤用）
【结果】
添加了EV-Save™（超滤用） 的TIG3的细胞培养上清及MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS附带的"Exosome Elution Buffer"实验组，比两者都没添加的实验组，外泌体的回收量增加了大约20%。
■ 超滤时EV-Save™（超滤用）的吸附抑制效果~人iPS细胞~
接下来验证人iPS细胞培养上清在进行超滤（Vivaspin 20，100K）浓缩前后，是否有发生外泌体损耗。
超滤后，培养上清中的外泌体会损耗大约60%，但添加EV-Save™（超滤用） 后，几乎能完全抑制超滤引起的外泌体损耗。
■ EV-Save™ 对细胞的毒性评估~人iPS细胞~
接着，使用人iPS细胞检验EV-Save™ （超滤用）的细胞毒性。将添加了1/100 EV-Save™ （超滤用）的达到1/5培养基量的TBS溶液加入培养基。人iPS细胞在配制好的培养基中培养3日，然后测量活细细胞数。
EV-Save™ （超滤用）几乎不影响人iPS细胞的增殖。
◆EV-Save™ 细胞外囊泡保存稳定剂（动物体内实验用） NEW！
■ EV-Save™（动物体内实验用）与EV-Save™ 的比较
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EV-Save™（动物体内实验用） （产品编号：050-09461） |
EV-Save™（超滤用） （产品编号：058-09261） |
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向体外排出 |
只含有分子量可排出体外的成分 |
暂无数据 |
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作为医药品添加剂使用实例 |
有 |
无 |
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用于动物实验 |
可 |
暂无数据 |
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用于超滤 |
不可 |
可 |
■ 应用数据
· 外泌体的冷冻保护效果
添加EV-Save™（超滤用） 和EV-Save™（动物体内实验用）至PS亲和法纯化的COLO201细胞来源外泌体中，冻融1次或3次。然后用PS Capture™ Exosome ELISA Kit（链霉亲和素HRP）（产品编号：298-80601）检测样品管内的外泌体量。
结果显示，在不添加EV-Save™（超滤用）的情况下，冻融会使外泌体标记CD9信号下降，但添加EV-Save™（超滤用）和EV-Save™（动物体内实验用）后可抑制CD9信号下降。
· 抑制外泌体的吸附作用
添加EV-Save™（超滤用）和EV-Save™（动物体内实验用）至PS亲和法纯化的COLO201细胞来源外泌体中，在4℃下存放16 h。然后，使用PS Capture™ Exosome ELISA Kit（链霉亲和素HRP）（产品编号：298-80601）检测样品管内的外泌体量。
结果显示，在不添加EV-Save™（超滤用）的情况下，外泌体量（CD9信号）下降，但添加EV-Save™（超滤用）和EV-Save™（动物体内实验用）后可抑制下降。
◆产品列表
|
产品编号 |
产品名称 |
包装 |
|
058-09261 |
EV-Save™ Extracellular Vesicle Blocking Reagent |
1 mL |
|
050-09461 |
EV-Save™ Extracellular Vesicle Blocking Reagent for 动物体内实验用 EV-Save™ 细胞外囊泡保存稳定剂（动物体内实验用） |
1 mL |
◆相关产品
■ 试剂盒产品
|
产品编号 |
产品名称 |
包装 |
|
299-77603 |
MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS |
2次 |
|
293-77601 |
10次 |
|
|
290-35591 |
Magnet Stand |
1个 |
|
297-79201 |
PS Capture™ Exosome ELISA Kit (Anti Mouse IgG POD) |
96次 |
|
297-79701 |
PS Capture™ Exosome Flow Cytometry Kit |
300次 |
|
290-80301 |
PS Capture™ Exosome Isolation Resin Kit PS Capture™外泌体提取树脂试剂盒 |
1 kit（0.5 mL浆状） |
■ 抗体
|
产品编号 |
产品名称 |
交叉性 |
包装 |
|
016-27061 |
Anti CD63, Monoclonal Antibody (3-13) |
人 |
20 µL |
|
012-27063 |
100 µL |
||
|
018-27641 |
Anti CD63, Monoclonal Antibody (3-13), Fluorescein Conjugated |
人 |
25次 |
|
014-27643 |
100次 |
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抑制对细胞外囊泡的实验仪器的吸附
EV-Save™ 细胞外囊泡保存稳定剂
参考文献
|
1. |
Jiang, L., Belinskaya, T., Zhang, Z., Chan, T. C., Ching, W. M., & Chao, C. C. (2021). Regulation of Serum Exosomal MicroRNAs in Mice Infected with Orientia tsutsugamushi. Microorganisms, 9 (1), 80.全文 |
| 产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 |
