PS Capture™ 外泌体ELISA试剂盒(链霉亲和素HRP)
PS Capture™ Exosome ELISA Kit(Streptavidin HRP)
常见问题
◆试剂盒规格、功能
Q1-1:一定要制备标准品吗?制备标准品时,是否必须使用MagCapture™ 外泌体提取试剂盒PS?
A1-1:定量检测时,需要制备作为标准品的细胞外囊泡。超速离心法和聚合物沉淀法等提取的细胞外囊泡也可作为
A1-1:标准品,但还是推荐使用与检测原理相同的PS亲和法提取的细胞外囊泡作为标准品。(详细制备方法请参
A1-1:考MagCapture™ 外泌体提取试剂盒PS的使用说明书)。
Q1-2:为什么没有配套的标准品?
A1-2:每种细胞分泌的细胞外囊泡的表面标记蛋白的种类和含量存在差异,标准品和检测样品的来源细胞必须一
A1-1:致。因此本试剂盒未配套标准品,请制备与样品相同来源细胞的细胞培养上清中提取的标准品。
Q1-3:血清、血浆样品可直接检测吗?
A1-3:PS Capture™ 外泌体ELISA试剂盒(Streptavidin HRP)可以直接检测。
A1-1:但是PS Capture™ 外泌体 ELISA 试剂盒( 抗小鼠 IgG POD)配套的检测二抗与人、小鼠、大鼠IgG发生
A1-1:非特异反应,不适用于人、小鼠、大鼠的血清和血浆样品的直接检测。
Q1-4:细胞培养上清样品可直接测定吗?
A1-4:无论哪个试剂盒都可以直接检测。由于PS Capture™ 外泌体 ELISA 试剂盒( 抗小鼠 IgG POD)配套的一抗
A1-1:(抗CD63抗体)和二抗都不与牛IgG发生非特异性反应,可直接检测无血清培养基和含FBS培养基的细胞培
A1-1:养上清。另外,PS Capture™ 外泌体ELISA试剂盒(链霉亲和素HRP)配套的生物素标记抗体(抗CD63-生
A1-1:物素),链霉亲和素HRP也相同。
A1-1:请用于细胞培养上清样品中的细胞外囊泡的定量分析和定性分析。
Q1-5:可以变更一抗吗?
A1-5:可以。使用PS Capture™ 外泌体 ELISA 试剂盒( 抗小鼠 IgG POD)时,先选择想检测的表面标记小鼠抗
A1-1:体,请根据使用说明书确定最佳浓度。
A1-1:使用PS Capture™ 外泌体ELISA试剂盒(链霉亲和素HRP)时,先选择任意的表面标记检测用生物素标记抗
A1-1:体,请根据使用说明书确定最佳浓度。无法获取生物素标记抗体时,可以使用Biotin Labeling Kit-SH(产
A1-1:品编号:348-90941)或Biotin Labeling Kit-NH2(产品编号:347-90891)非标记抗体进行生物素标记。
Q1-6:残留的试剂应该如何保存?
A 1-6:请参考使用说明书的【6.试剂盒拆分使用时,各组成试剂的保存方法】。
Q1-7:哪些细胞是有纯化实例以及检测实例的细胞。
A1-7:下表为Wako已测试过的细胞系
细胞株
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来源
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Isolation
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ELISA
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A549
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人肺泡基底上皮腺癌
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ー
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〇
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BxPC-3
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人胰腺癌
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ー
|
〇
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COLO201
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人结肠癌
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〇
|
〇
|
COS7
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非洲绿猴肾
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〇
|
〇
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FM3A
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小鼠乳腺癌
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〇
|
〇
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HCT116
|
人结肠癌
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〇
|
〇
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HEK293
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人胚胎肾
|
〇
|
〇
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HEK293T
|
人胚胎肾
|
〇
|
〇
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HeLa
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人宫颈癌
|
〇
|
〇
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HPAF Ⅱ
|
人胰腺肿瘤
|
ー
|
〇
|
HuH-7
|
人肝癌
|
〇
|
〇
|
HUVEC
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人脐静脉内皮细胞
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〇
|
〇
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iPS
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诱导多能干细胞
|
〇
|
〇
|
K562
|
人慢性粒细胞白血病
|
〇
|
〇
|
LNCaP
|
人前列腺癌
|
〇
|
〇
|
P388D1
|
小鼠白血病
|
〇
|
〇
|
Panc-1
|
人胰腺癌
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ー
|
〇
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RAJI
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人伯基特淋巴瘤·B淋巴细胞样
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〇
|
〇
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SH-SY5Y
|
人神经母细胞瘤
|
ー
|
〇
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TIG-3
|
正常的二倍体成纤维细胞
|
〇
|
〇
|
THP-1
|
急性单核细胞白血病
|
〇
|
〇
|
U2OS
|
人骨肉瘤
|
〇
|
〇
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BM-MSC
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骨髄来源间充质干细胞
|
〇
|
〇
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iCell-MSC
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iPS 来源间充质干细胞-01279
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〇
|
〇
|
ー:未测试 〇:有纯化和检测数据
Q1-8:本试剂盒可以检测细胞外囊泡的回收率吗?
A1-8:可以,请参考P25的与聚合物沉淀法比较回收率。
◆与传统方法比较
Q2-1:检测灵敏度高吗?
A 2-1:已证实该试剂盒检测细胞外囊泡,相比使用固相化抗体的ELISA方法或将纯化样品直接固定在平板上的灵敏
A1-1:度要更高。此外,已经实验验证本试剂盒与Western blotting有相关性。
◆试剂盒的操作方法、组成
Q3-1:本试剂盒的操作时间需要多久?
A 3-1:PS Capture™ 外泌体 ELISA 试剂盒( 抗小鼠 IgG POD)的操作流程需要约5 h。具体包括:①将细胞外囊
A1-1:泡样品固定在孔板上需要2 h;②一抗的反应需要1 h;③二抗反应需要1 h;④TMB反应需要30 min。再加
A1-1:上其他清洗操作,大约需要5 h才能完成检测。
A1-1:PS Capture™ 外泌体ELISA试剂盒( 链霉亲和素HRP)的操作流程需要约6 h。具体包括:①将细胞外囊泡
A1-1:样品固定在孔板上需要2 h;②一抗的反应需要1 h;③链霉亲和素 HRP反应需要2 h;④TMB反应需要30
A1-1:min。再加上其他清洗操作,大约需要6 h才能完成检测。
A1-1: 添加终止液后,检测450 nm和副波长620 nm(600~650 nm)的吸光度。
Q3-2:Exosome Capture 96 Well Plate是可循环使用的吗?
A 3-2:终止液会使孔板上的蛋白变性,因此不可循环利用。
Q3-3:实验操作中有可以留到第二天的步骤吗?
A 3-3:将各样品固定在孔板上并保存于4℃,过夜反应也是没有问题的。
◆样品用量
Q4-1:检测使用的样品的最低量是多少?
A 4-1:有相当于1 ng左右细胞外囊泡的蛋白即可检测。从COLO201细胞培养上清中提取的细胞外囊泡检测界限为
A1-1:11 pg。(细胞系不同检测界限也随之变化。)
Q4-2:直接检测培养上清和体液样品时,需要多少样品?
A 4-2:几微升(1~5 μL)左右的细胞培养上清和体液样品即可充分检测。建议用于检测培养基中的细胞外囊泡量
A1-1:随时间变化,以及分析新型培养上清样品。但由于细胞类型(iPS细胞等)不同,可能出现培养基中的细胞
A1-1:外囊泡量少的情况。不清楚样品中的细胞外囊泡量时,推荐进行预实验确定合适的上样量。
◆相关产品
Q5-1:有推荐使用的一抗吗?
A5-1:以下抗体是Wako已验证可在该ELISA法中使用的抗体。
抗原
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反应
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抗体
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生产商
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应用
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CD9
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人、牛
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抗CD9小鼠单克隆抗体(1K)
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Wako, 产品编号: 018-27761, 014-27763
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WB、ELISA、FCM、IP
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CD63
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人
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抗CD63小鼠单克隆抗体(3-13)
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Wako,产品编号: 016-27061, 012-27063
|
WB、ELISA、FCM、IP
|
CD81
|
人
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抗CD81小鼠单克隆抗体(17B1)
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Wako, 产品编号: 015-27771, 011-27773
|
WB、ELISA、FCM、IP
|
CD9
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小鼠
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抗CD9大鼠单克隆抗体(MZ3)
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Bio Legend, 产品编号:124802
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ELISA
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CD63
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小鼠
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抗CD63大鼠单克隆抗体(NVG-2)
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Bio Legend, 产品编号:143902
|
ELISA
|
CD81
|
小鼠
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抗CD81亚美尼亚仓鼠单克隆抗体(Eat-2)
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Bio Legend, 产品编号:104902
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ELISA
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◆疑难
Q6-1:无法顺利检测结果,应该如何处理?
A6-1:请确认使用的各个试剂是否都还在有效期内。请务必添加Exosome Binding Enhancer(100×)至
A1-1:Washing Buffer。若是无法确认试剂盒配套的Control Primary Antibody Anti CD63(100×)和
A1-1:Control Biotinylated Antibody Anti-CD63(100×)的信号的情况下,请考虑CD63的表达量是否
A1-1:在检测界限之下或其他原因,或咨询Wako在当地的代理商。