自噬荧光标记探针![2314798654701305.jpg 自噬荧光标记探针 Mitophagy Detection Kit](http://www.boykyo.com/wp-content/uploads/2022/01/20220109_61dabd745b1e8.jpg)
Mitophagy Detection Kit
◆概要
![2314798654181441.jpg 自噬荧光标记探针 Mitophagy Detection Kit](http://www.boykyo.com/wp-content/uploads/2022/01/20220109_61dabd7463977.jpg)
Mitophagy Detection Kit 是低分子荧光试剂的自噬检出试剂盒。通常情况下,观察自噬是需要pH传感器荧光蛋白在细胞中表达出来。但是,本试剂盒不需要荧光蛋白表达,通过简单操作便可观察自噬。
◆特点
● 使用低分子荧光试剂便可简便检出自噬
● 适用于荧光显微镜活细胞成像
● 通过和附带的溶酶染色试剂的联合染色,可以观察自噬
◆自噬(Mitophagy)是什么?
线粒体作为能量产生的场所,是在细胞中担当重要机能的细胞器。另一方面,积蓄的因氧化应激和DNA损伤等不良线粒体,是引发阿尔茨海默氏症和帕金森氏病的原因。
自噬是能选择性去除不良线粒体的系统。首先,通过自噬体将不良线粒体隔离,然后自噬体与溶酶体融合,线粒体被消化。
◆Mitophagy Detection Kit 使用实例
通过使用Parkin表达HeLa细胞的 carbonyl cyanide m-chlorophenylhydrazone(CCCP)的自噬诱导。
![2314798654247759.jpg 自噬荧光标记探针 Mitophagy Detection Kit](http://www.boykyo.com/wp-content/uploads/2022/01/20220109_61dabd7476424.jpg)
图一:使用了Parkin表达HeLa细胞(上部分图片)和未表达HeLa细胞(下部分图片)的自噬观察
A,D):Mtphagy Dye 的荧光图像
B,E):Lyso Dye 的荧光图像
C,F):Mtphagy Dye 和 Lyso Dye 的联合染色荧光图像
条件:
Mtphagy Dye:激发550 ± 25 nm、荧光发光605 ± 35 nm
Lyso Dye:激发470 ± 20 nm、荧光发光525 ± 25 nm
操作方法:
● 播种细胞,培养过夜
● 在细胞中导入使用了HilyMax [Code:H357]的Parkin质粒,培养过夜
● 使用Hanks’HEPES缓冲液洗涤两次
● 添加100 nmol/L Mtphagy Dye working solution孵化30分钟
● 使用Hanks’ HEPES 缓冲液洗涤两次
● 在含有10 μmol/L CCCP的培养基培养24小时
● 通过荧光显微镜观察到发生自噬后,去除含有CCCP培养基,添加1 μmol/L Lyso Dye working solution孵化30分钟
● 使用Hanks’ HEPES 缓冲液洗涤一次后,通过荧光显微镜观察被Mtphagy Dye和Lyso Dye联合染色
◆Mtphagy Dye・Lyso Dye 的激发光谱和荧光光谱
![2314798654361274.jpg 自噬荧光标记探针 Mitophagy Detection Kit](http://www.boykyo.com/wp-content/uploads/2022/01/20220109_61dabd749d2ba.jpg)
图2:Mtphagy Dye, Lyso Dye 的激发光谱和荧光光谱
Mtphagy Dye:激发550 ± 25 nm、荧光发光605 ± 35 nm
Lyso Dye:激发470 ± 20 nm、荧光发光525 ± 25 nm