自噬荧光标记探针

Mitophagy Detection Kit

◆概要

Mitophagy Detection Kit 是低分子荧光试剂的自噬检出试剂盒。通常情况下，观察自噬是需要pH传感器荧光蛋白在细胞中表达出来。但是，本试剂盒不需要荧光蛋白表达，通过简单操作便可观察自噬。

◆特点

●　使用低分子荧光试剂便可简便检出自噬

●　适用于荧光显微镜活细胞成像

●　通过和附带的溶酶染色试剂的联合染色，可以观察自噬

◆自噬（Mitophagy）是什么？

线粒体作为能量产生的场所，是在细胞中担当重要机能的细胞器。另一方面，积蓄的因氧化应激和DNA损伤等不良线粒体，是引发阿尔茨海默氏症和帕金森氏病的原因。

　　自噬是能选择性去除不良线粒体的系统。首先，通过自噬体将不良线粒体隔离，然后自噬体与溶酶体融合，线粒体被消化。

◆Mitophagy Detection Kit 使用实例

通过使用Parkin表达HeLa细胞的 carbonyl cyanide m-chlorophenylhydrazone（CCCP）的自噬诱导。

图一：使用了Parkin表达HeLa细胞（上部分图片）和未表达HeLa细胞（下部分图片）的自噬观察

　　　　　　　　　　　　　　　　Ａ，Ｄ）：Mtphagy Dye 的荧光图像

　　　　　　　　　　　　　　　　Ｂ，Ｅ）：Lyso Dye 的荧光图像

　　　　　　　　　　　　　　　　Ｃ，Ｆ）：Mtphagy Dye 和 Lyso Dye 的联合染色荧光图像

条件：

　　Mtphagy Dye：激发550 ± 25 nm、荧光发光605 ± 35 nm

　　Lyso Dye：激发470 ± 20 nm、荧光发光525 ± 25 nm

操作方法：

　　●　播种细胞，培养过夜

　　●　在细胞中导入使用了HilyMax [Code:H357]的Parkin质粒，培养过夜

　　●　使用Hanks’HEPES缓冲液洗涤两次

　　●　添加100 nmol/L Mtphagy Dye working solution孵化30分钟

　　●　使用Hanks’ HEPES 缓冲液洗涤两次

　　●　在含有10 μmol/L CCCP的培养基培养24小时

　　●　通过荧光显微镜观察到发生自噬后，去除含有CCCP培养基，添加1 μmol/L Lyso Dye working solution孵化30分钟

　　●　使用Hanks’ HEPES 缓冲液洗涤一次后，通过荧光显微镜观察被Mtphagy Dye和Lyso Dye联合染色

◆Mtphagy Dye・Lyso Dye 的激发光谱和荧光光谱

图2：Mtphagy Dye, Lyso Dye 的激发光谱和荧光光谱

　　Mtphagy Dye：激发550 ± 25 nm、荧光发光605 ± 35 nm

Lyso Dye：激发470 ± 20 nm、荧光发光525 ± 25 nm