GE 实验试剂 Hyclone PBS磷酸盐缓冲液（1x） 500ml
GE 实验试剂 Hyclone PBS磷酸盐缓冲液（1x） 500ml，PH值：7.0-7.2，0.0067M（PO4），不含钙、镁，0.1微米无菌过滤。
运输中要避光冷藏，瓶口保持向上，切勿剧烈振荡；
开瓶后不要长时间暴露在空气和强光下，以保持滤膜的稳定性；
开瓶后能在一周内用完，短时间内用不完可分装冷藏保存，但PH值会在随后的时间里慢慢变碱，属于正常现象，请放心使用；
所有液体滤膜均经100纳米无菌过滤和出厂严格检测，除非需要，请不要私自进行二次过滤和任何形式的无菌检测。
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特点：
● 定位线粒体
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产品概述
MitoPeDPP是一种新型荧光染料，由于其具有三苯基膦结构，因此可以穿过细胞膜并在线粒体中聚集。
聚集在线粒体内膜上的MitoPeDPP可以被脂质过氧化物氧化而释放出强荧光。由于氧化的MitoPeDPP
(Ox-MitoPeDPP) 的激发和发射波长分别是452 nm和470 nm，可以减小样品的光损伤和自发荧光，因此利用
荧光显微镜MitoPeDPP可以检测活细胞中的脂质过氧化物。
特点
1.特异性的在细胞中线粒体内聚集
2.可以检测线粒体膜内的脂质过氧化物
3.可以在488 nm和535 nm的荧光波长下进行检测
* 本产品由福冈大学化学系的Dr. Shioji开发
*由于MitoPeDPP量极少不宜看到，可以通过观察MitoPeDPP DMSO溶液的颜色是否为黄色来判断。
检测原理
MitoPeDPP可以穿过细胞膜并在线粒体中聚集。聚集在线粒体内膜上的MitoPeDPP可以被脂质过氧化物氧化而释放出强荧光。
实验例
1.MitoPeDPP和线粒体染色试剂MitoBright共同染色的实施例
在HeLa细胞中添加t-BHP（氢过氧化叔丁基），检测脂质过氧化物
波长（wavelength/band pass）
MitoPeDPP：470/40（Ex），525/50（Em）
MitoBright DeepRed：600/50（Ex），685/50（Em）
结果证实在HeLa细胞内的线粒体中，MitoPeDPP受t-BHP氧化后会发出荧光。另外通过与线粒体染色试剂（MitoBright Deep Red:MT08）的共染色，确认了MitoPeDPP的荧光是定位在线粒体中。
2.检测添加Rotenone产生的脂质过氧化物
向HeLa细胞[μ-slide，8孔（由Ibidi制造）]中添加MitoPeDPP之后，添加Rotenone溶液并使用荧光显微镜观察。实验结果证实，添加Rotenone后，检测到细胞中产生了脂质过氧化物。
Rotenone的刺激时间：0 min(左)，90 min(中)，180 min(右)
上部）荧光图，下部）明场图
3.神经细胞使用MitoPeDPP的实验例
A.荧光显微镜检测
向NIE-115细胞（小鼠神经芽细胞瘤）添加异黄素，诱导Ca2+流入细胞内，并通过MitoPeDPP的荧光染色来观察线粒体膜内的脂溶性过氧化物的产生。实验结果证实添加了异霉素的实验组相比对照组来说荧光更强。
B. 平均荧光强度数据比较
为了量化对照组细胞和添加了离子霉素的细胞的荧光强度，对两组数据进行基于平均荧光强度的比较。
结果证实，加入离子霉素后30分钟的细胞对比对照组的细胞，观察到的荧光强度显着增加。
数据提供（Free Radical Research, in press)
参照芝浦工业大学系统理工学院 福井浩二副教授、中村沙希[参考文献3]
4.MitoPeDPP反应的选择性
在不含细胞的反应体系中，MitoPeDPP可以与各种过氧化物如H2O2，t-BHP和ONOO- 反应，但是在细胞中，积
累在线粒体中的MitoPeDPP可以被t-BHP氧化而释放出较强荧光 (图3A)，却和其它ROS或RNS反应很弱 (图3B)。
A) 在HepG2细胞中加入MitoPeDPP培养15 min，然后用100 μmol / l的t-BHP处理。
B) 在HepG2细胞中加入MitoPeDPP培养15 min后，加入ROS、RNS诱导剂。
分别加入100 μmol / l (H2O2，NO和ONOO-诱导剂)和10 μmol / l PMA（O2-.诱导剂） 。
左边为明场图，右边为荧光图
* t-BHP：tert-Butylhydroperoxide; PMA, Phorbol myristate acetate;
SIN-1, 3-(Morpholinyl)sydnonimine, hydrochloride;
NOC 7, 1-Hydroxy-2-oxo-3-(N-methyl-3-aminopropyl)-3-methyl-1-triazene
波长/带通滤波器：470/40 (Ex), 525 /50 (Em)
参考文献
1) K. Shioji K, Y. Oyama, K. Okuma and H. Nakagawa, “Synthesis and properties of fluorescence probe for detection of peroxides in mitochondria.”, Bioorg Med Chem Lett., 2010, 20, (13), 3911.
2) S. Oka, J. Leon, K. Sakumi, T. Ide, D. Kang, F. M. LaFerla and Y. Nakabeppu, “Human mitochondrial transcriptional factor A breaks the mitochondria-mediated vicious cycle in Alzheimer’s disease”, Scientific Reports ., 2016, DOI: 10.1038/srep37889 , .
3) S. Nakamura, A. Nakanishi, M. Takazawa, S. Okihiro, S. Urano and K. Fukui, “Ionomycin-induced calcium influx induces neurite degeneration in mouse neuroblastoma cells: Analysis of a time-lapse live cell imaging system”, Free Radical Research., 2016, 50, (11), 1214.
4) M. Akimoto, R. Maruyama, Y. Kawabata, Y. Tajima and K. Takenaga, “Antidiabetic adiponectin receptor agonist AdipoRon suppresses tumour growth of pancreatic cancer by inducing RIPK1/ERKdependent necroptosis”, Cell Death Dis., 2018, 9, 804.
5) M. Álvarez-Córdoba, A. Fernández Khoury, M. Villanueva-Paz, C. Gómez-Navarro, I. Villalón-García, J. M. Suárez-Rivero, S. Povea-Cabello, M. Mata, D. Cotán, M. Talaverón-Rey, A. J. Pérez-Pulido, J. J. Salas, E. M. Pérez-Villegas, A. Díaz-Quintana, J. A. Armengol, J. A. Sánchez-Alcázar , “Pantothenate Rescues Iron Accumulation in Pantothenate Kinase-Associated Neurodegeneration Depending on the Type of Mutation.”, Mol. Neurobiol. ., 2019, 56, (5), 3638.
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25支/盒。由高纯纤维素棉绒制成。标准套管壁厚约为1mm（颗粒保留度为10μm）。加厚型提取套管厚度约为2mm（颗粒保留度为6μm），用于高保留力和增加湿强度、干强度或特殊要求的应用。zui高操作温度达120℃。可供应内直径19-43mm，长度90-123mm的多种规格标准套管和加厚型套管。
GE Whatman沃特曼 提取套管25*100mm定货信息:
| 品名 | 规格 | 备注 |
| 2800-228纤维素提取套管 | 管类型 标准;内径×长度:22×80mm | 25支/盒 |
| 2800-258纤维素提取套管 | 管类型标准 ;内径×长度:25×80mm | 25支/盒 |
| 2800-250纤维素提取套管 | 管类型标准;内径×长度:25×100mm | 25支/盒 |
| 2800-300纤维素提取套管 | 管类型标准 ;内径×长度:30×100mm | 25支/盒 |
| 2800-338纤维素提取套管 | 管类型标准 ;内径×长度:33×80mm | 25支/盒 |
| 2810-228纤维素提取套管 | 管类型加厚 ;内径×长度:22×80mm | 25支/盒 |
| 2810-258纤维素提取套管 | 管类型加厚 ;内径×长度:25×80mm | 25支/盒 |
| 2810-250纤维素提取套管 | 管类型加厚 ;内径×长度:25×100mm | 25支/盒 |
| 2810-308纤维素提取套管 | 管类型加厚 ;内径×长度:30×80mm | 25支/盒 |
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特点：
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NO.3. MitoPeDPP 线粒体内脂质过氧化物检测
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产品概述
研究证实铁是生物体内量最多的过渡金属元素。其参与多种生理活动。近几年，细胞内的游离铁离子由于具有很高的反应性，和细胞损伤、死亡有一定的关联而得到了越来越多的关注。在细胞内游离铁离子以稳定的Fe2+和 Fe3+形式存在。从细胞内的还原环境，金属转运体及Fe2+的水溶性考虑，认为揭示细胞内Fe2+的行为比Fe3+更重要。Mito-FerroGreen是一种新型荧光探针，用于检测线粒体 (铁硫簇和血红素蛋白的合成场所) 内亚铁离子Fe2+。
该产品已在岐阜药科大学药物化学实验室的 永澤秀子 和 平山祐 博士的指导下开发。
测定原理
产品特点
铁离子检测试剂的选择
可以根据自己的实验方法和实验仪器选择检测试剂
| FerroOrange | Mito-FerroGreen | |
| 细胞内分布 | 细胞内 | 线粒体 |
| 荧光特性 | λex : 543 nm、λem : 580 nm | λex : 505 nm、λem : 535 nm |
| 检测仪器 | 荧光显微镜 | 荧光显微镜 （FITC、GFP） |
| （滤镜） | ||
| 检测对象 | 活细胞 | 活细胞 |
| 染色次数 | 24 μg可染色35 mm dish 17块板 | 50 μg可染色35 mm dish 5块板 |
| （终浓度 1 μmol/l時） | （终浓度 5 μmol/l時） |
实验例
1.线粒体定位
为了确认Mito-FerroGreen的是否特异性地在线粒体内定位，与线粒体染色试剂（MitoBright Deep Red※）一同进行染色，实验结果证实了Mito-FerroGreen选择性地染色在线粒体内。
向HeLa细胞中添加5μmol/ l的Mito-FerroGreen和200 nmol/l的线粒体染色探针MitoBright Deep Red，并在CO2培养箱中培养30分钟，然后添加100μmol/ l的硫酸铁铵（II），并将混合后的细胞溶液在CO2培养箱中培养1小时后通过观察荧光。
Mito-FerroGreen
激发波长：488 nm
发射波长：500-565 nm
MitoBright Deep Red
激发波长：640 nm
发射波长：656-700 nm
2.线粒体内的铁离子荧光成像
在含有血清的MEM培养基中接种HeLa细胞，并加入Mito-FerroGreen，通过荧光检测HeLa细胞众线粒体内的二价铁（左图）。而在添加了铁离子的HeLa细胞中，观察到了Mito-FerroGreen的荧光明显增强（中间图）。在添加了铁螯合剂的细胞中，几乎未观察到Mito-FerroGreen的荧光（右图）。 以这种方式，证实了线粒体中铁含量的差异和荧光强度的差异是成相关性的。
3.对二价铁离子的高度选择性和高信号
向1ml 50mmol/l HEPES Buffer（pH7.4）中加入2μl 1mol/l Mito-FroGreen、2μl 10mmol/l各种金属以及20μl 1mg/ml酯化酶，在室温下反应1小时后测定荧光强度。
激发波长：500 nm
发射波长：535 nm
4.适用于通用滤光片
Mito-FerroGreen的激发波长为488nm，最大激发波长可达505nm。
向3ml 50 mmol/l HEPES Buffer (pH7.4) 中加入 6μl 1mol/l Mito-FroGreen、6μl 10mmol/l硫酸铵铁（Ⅱ）以及20μl 1mg/ml酯化酶。在37℃下反应1小时后检测荧光强度。
激发波长：500 nm
发射波长：535 nm
参考文献
1) T. Hirayama, S. Kadota, M. Niwa and H. Nagasawa, “A mitochondria-targeted fluorescent probe for selective detection of mitochondrial labile Fe(II)”, Metallomics., 2018, DOI: 10.1039/C8MT00049B
2) T. Issitt, E. Bosseboeuf, N. Winter, N. Dufton, G. Gestri, V. Senatore, A. Chikh, A. Randi, C. Raimondi, “Neuropilin-1 controls endothelial homeostasis by regulating mitochondrial function and iron-dependent oxidative stress via ABCB8”, iScience., 2018,DOI: 10.1016/j.isci.2018.12.005 .
3) E. E. Mon, F. Y. Wei, R. N. R. Ahmad, T. Yamamoto, T. Moroishi and K. Tomizawa, “Regulation of mitochondrial iron homeostasis by siderofexin 2 “, J Physiol Sci., 2018,doi:10.1007/s12576-018-0652-2.
4) M. Fujimaki, N. Furuya, S. Saiki, T. Amo, Y. Imamichi and N. Hattori, “Iron supply via NCOA4-mediated ferritin degradation maintains mitochondrial functions”, Mol. Cell. Biol.., 2019,doi: 10.1128/MCB.00010-19.
5) K. Tomita, M. Fukumoto, K. Itoh, Y. Kuwahara, K. Igarashi, T. Nagasawa, M. Suzuki, A. Kurimasa and T. Sato, “MiR-7-5p is a key factor that controls radioresistance via intracellular Fe2+ content in clinically relevant radioresistant cells.”, Biochem Biophys Res Commun.., 2019,doi: 10.1016/j.bbrc.2019.08.117.
6) Y. Wang and M. Tang, “PM2.5 induces ferroptosis in human endothelial cells through iron overload and redox imbalance”, Environ. Pollut., 2019, 264, doi: 10.1016/j.envpol.2019.07.105.
7) KF. Yambire, C. Rostosky, T. Watanabe, D. Pacheu-Grau, S. Torres-Odio,A. Sanchez-Guerrero,O. Senderovich, EG. Meyron-Holtz,I.Milosevic, J. Frahm, AP. West and N. Raimundo, “Impaired lysosomal acidification triggers iron deficiency and inflammation in vivo.”, Elife, 2019, 3, (8), doi:10.7554/eLife.51031.
8) H. Nishizawa, M. Matsumoto, T. Shindo, D. Saigusa, H. Kato, K. Suzuki, M. Sato, Y. Ishii, H. Shimokawa and K. Igarashi, “Ferroptosis is controlled by the coordinated transcriptional regulation of glutathione and labile iron metabolism by the transcription factor BACH1″, J. Biol. Chem., 2019,doi: 10.1074/jbc.RA119.009548.
9)Y. akashima, A. Hayano and B. Yamanaka, Metabolome analysis reveals excessive glycolysis via PI3K/AKT/mTOR and RAS/MAPK signaling in methotrexate-resistant primary CNS lymphoma-derived cells.”, Clin. Cancer Res., 2020, DOI:10.1158/1078-0432.
常见问题Q&A
| Q1：是否可以对酵母进行染色吗？ |
| A1：我们公司有酵母染色的实验例，染色的具体实验步骤请联系我们公司的销售人员。 |
| Q2：推荐使用的滤光片波长是多少？ |
| A2：检测时推荐的滤光片如下：
激发波长：450~500 nm 发射波长：515~550 nm |
规格性状
性状：本品溶于乙腈、甲醇、二甲醇。
纯度（HPLC）：90.0%以上
荧光光谱：适合测试
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