产品名称：Whatman 沃特曼 UNIFILTER 384孔DNA吸附过滤微孔板
产品型号：7700-2110
产品报价：15
产品特点：Whatman 沃特曼 UNIFILTER 384孔DNA吸附过滤微孔板能高效的吸附和纯化了DNA分子。它提供了高重现性的结果和超过2µg/孔的产率，经过吸附-清洗-提取的步骤通过过滤得到收集物。Z低限度的液体悬挂减少了洗脱体积，保证了DNA浓度高达150ng/µl。不再需要乙醇沉淀，DNA随时可用。
384孔DNA吸附过滤微孔板能高效的吸附和纯化了DNA分子。它提供了高重现性的结果和超过2μg/孔的产率，经过吸附-清洗-提取的步骤通过过滤得到收集物。zui低限度的液体悬挂减少了洗脱体积，保证了DNA浓度高达150ng/μl。不再需要乙醇沉淀，DNA随时可用。
特点和优点
上海金畔社生物科技有限公司日本同仁化学dojindo全线产品代理 中国代理商
C51H41N2O8P
840.85
特点：
● 特异性检测铁死亡相关的脂质过氧化
● 比BODIPY C11更适合于胞内定位
● 铁死亡常见指标之一
活动进行中
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凑单关联产品TOP5
NO.1. FerroOrange 细胞亚铁离子检测
NO.2. GSSG/GSH Quantification Kit II 氧化型/还原型谷胱甘肽
NO.3. Cell Counting Kit-8 细胞增殖毒性检测
NO.4. Mito-FerroGreen 线粒体内亚铁离子检测
NO.5. ROS Assay Kit 活性氧检测
规格性状
性状：深红色结晶粉末或固体。
纯度（HPLC）：90.0%以上
核磁共振谱：符合一致性
<使用次数>每50µg可用5-50次
产品概述
Liperfluo是Spy-LHP的类似物，可用于检测脂质过氧化物 (LPO)，Liperfluo会被脂质过氧化物特异性氧化而在乙醇等有机溶剂中发出很强的荧光。由于氧化型Liperfluo的激发和发射波长分别为524 nm和535 nm (均为长波长)，因此可以减轻光对测定样品的损伤和降低样品的自发荧光。由于Liperfluo在二异喹啉环的一个末端连接有四乙二醇基团，因此提高了它在水溶液中的分子分散性。虽然它的氧化型在水溶液中几乎没有荧光，但是在细胞膜等脂溶性高的部位会产生较强的荧光。因此Liperfluo适用于活细胞中脂质过氧化物的荧光成像或流式分析。
特点：
1）能够成像和检测细胞中的脂质过氧化物
2）长波长激发，可以减少光损伤和自发荧光对细胞的影响
3）高度脂质过氧化物特异性
研究领域
在铁死亡研究中：
作为细胞死亡形式之一，在铁死亡研究中使用到Liperfluo
| 细胞种类
（铁死亡诱导剂） |
论文信息 |
| 人支气管上皮细胞（RSL3） | Pseudomonas aeruginosa utilizes host polyunsaturated phosphatidylethanolamines to trigger theft-ferroptosis in bronchial epithelium. |
| 小鼠成纤维细胞(RSL3) | Oxidized arachidonic and adrenic PE s navigate cells to ferroptosis. |
| HeLa细胞(添Erastin或Brefeldin A) | Golgi stress mediates redox imbalance and ferroptosis in human cells. |
原理
Liperfluo是Spy-LHP的类似物，可用于检测脂质过氧化物 (LPO)，Liperfluo会被脂质过氧化物特异性氧化而在乙醇等有机溶剂中发出很强的荧光。由于氧化型Liperfluo的激发和发射波长分别为524 nm和535 nm (均为长波长)，因此可以减轻光对测定样品的损伤和降低样品的自发荧光。由于Liperfluo在二异喹啉环的一个末端连接有四乙二醇基团，因此提高了它在水溶液中的分子分散性。虽然它的氧化型在水溶液中几乎没有荧光，但是在细胞膜等脂溶性高的部位会产生较强的荧光。因此Liperfluo适用于活细胞中脂质过氧化物的荧光成像或流式分析。
荧光特性
激发波长Ex：488 nm，发射波长Em：500-550 nm
操作步骤
1.在dish等容器中接种细胞并培养。
2.去除培养基后，用无血清培养基清洗一次。
3.加入合适浓度的Liperfluo工作液，在37℃培养30 min。
※请根据细胞种类，诱导药物等实验条件，摸索最佳的Liperfluo工作液浓度。
4.去除上清液后，用无血清培养基清洗2次。
5.用荧光显微镜或流式细胞仪进行检测。
实验例
用激光共聚焦荧光显微镜观察HeLa细胞
1) 在 μ-slide 8孔板中 (ibidi公司) 接种HeLa细胞 (3.0×104个/孔、含血清MEM培养基)，在37℃ 5%的CO2培养箱中过夜培养。
2) 去除培养基，用无血清MEM培养基清洗细胞1次。
3) 将200 μl用无血清MEM培养基稀释的1 μmol/l的Liperfluo溶液加入8孔板中，在37℃ 5%的CO2培养箱中培养30 min。
4) 去除溶液，用200 μl HBSS清洗2次。
5) 均匀地加入200 μl用HBSS稀释的500 μmol/l的 t-BHP(tert-Buthyl Hydroperoxide) 溶液，在37℃ 5%的CO2培养箱中培养60 min。
6) 用共焦荧光显微镜观察 (激发波长：488 nm，发射波长：500-550 nm)。
用流式细胞仪检测HeLa细胞
1) 将HeLa细胞 (1.0×105个/孔、含血清MEM培养基) 接种至6孔板(Thermo公司) 中，在37℃ 5%的CO2培养箱中过夜培养。
2) 去除培养基，用无血清MEM培养基清洗细胞1次。
3) 将2 ml用无血清MEM培养基稀释的1 μmol/l的Liperfluo溶液加入6孔板中，在37℃ 5%的CO2培养箱中培养30 min。
4) 去除溶液，用2 ml HBSS清洗2次。
5) 均匀地加入2 ml用HBSS稀释的500 μmol/l的t-BHP (tert-Buthyl Hydroperoxide) 溶液，在37℃ 5%的CO2培养箱中培养60 min。
6) 用胰酶消化细胞后，用含有血清的MEM培养基重悬细胞，移至管中并将培养基更换为HBSS。
7) 用流式细胞仪检测 (激发波长：488 nm，发射波长：515-545 nm)。
用Erastin诱导铁死亡细胞的荧光成像
1) 在 μ-slide 8孔板中 (ibidi公司) 接种A549细胞 (1.0×105个/孔、含血清DMEM培养基)，在37℃ 5%的CO2培养箱中过夜培养。
2) 去除培养基，加入200 μl用无血清DMEM培养基稀释的50 μmol/l的Erastin溶液，在37℃ 5%的CO2培养箱中过夜培养。
3) 去除培养基，用200 μl HBSS清洗2次。
4) 去除HBSS，加入200 μl用HBSS稀释的1 μmol/l的Liperfluo溶液，在37℃ 5%的CO2培养箱中培养30 min。
5) 去除溶液，用200 μl HBSS清洗2次。
6) 用激光共焦荧光显微镜观察 (激发波长：488 nm，发射波长：500-550 nm)。
常见问题Q&A
| Q1.文献实验方法：先加Liperfluo，后加药；说明书实验方法：先加药，后加探针， 哪种方法比较好？ |
| A1: 都可以。
先加Liperfluo再加药 用共聚焦荧光显微镜观察HeLa细胞 （1）在μ-slide 8孔板中（ibidi公司）接种HeLa细胞（3.0×104个/孔、含血清MEM培养基），在37℃ 5%的CO2培养箱中过夜培养。 （2）去除培养基，用无血清MEM培养基清洗细胞一次。 （3）将200 μl无血清MEM培养基稀释后的1 μmol/l的Liperfluo溶液加入8孔板中，在37℃ 5%的CO2培养箱中培养30 min。 （4）去除溶液，用200 μl HBSS清洗2次。 （5）均匀地加入200 μl用HBSS稀释的500 μmol/l的t-BHP(tert-Buthyl Hydroperoxide) 溶液，在37℃ 5%的CO2培养箱中培养60 min。 （6）用共焦荧光显微镜观察 (激发波长：488 nm，发射波长：500-550 nm)。 先加药再加Liperfluo （1）在 μ-slide 8孔板中 (ibidi公司) 接种A549细胞 (1.0×105个/孔、含血清DMEM培养基)， 在37℃ 5%的CO2培养箱中过夜培养。 （2）去除培养基，加入200 μl用无血清DMEM培养基稀释的50 μmol/l的Erastin溶液， 在37℃ 5%的CO2培养箱中过夜培养。 （3）去除培养基，用200 μl HBSS清洗2次。 （4）去除HBSS，加入200 μl用HBSS稀释的1 μmol/l的Liperfluo溶液， 在37℃ 5%的CO2培养箱中培养30 min。 （5）去除溶液，用200 μl HBSS清洗2次。 （6）用激光共焦荧光显微镜观察 (激发波长：488 nm，发射波长：500-550 nm)。 |
| Q2. Liperfluo如果按照文献进行，先加探针，后加药，荧光淬灭时间为2小时可能无法满足实验，希望延长荧光时间，是否有好的方法？或者是否可以加荧光防淬灭剂？ |
| A2: 关于荧光抗淬灭剂：由于抗淬灭剂的作用原理，有可能无法在实验中使用。
其他的改善方法： (1)如果褪色的原因是由光源照射造成的褪色。可以尝试减小光源强度进行观测。 (2)清洗操作后长时间放置可能会造成探针向细胞外漏出。可考虑不清洗直接观察。 |
| Q3.Liperfluo由于是活细胞荧光探针，如果铁死亡发生，导致细胞膜破裂后，荧光是否存在？ |
| A3:由于Liperfluo是活细胞探针，对死细胞无法发挥出探针的正常性能。 |
| Q4：培养基中酚红或血清对实验有没有影响？此外，在背景高或荧光弱的情况下有没有改善意见？ |
| A4:可用于酚红或含血清培养基。但是，如果背景高，请用PBS替换。 此外，当背景较高时，Liperfluo可能会被光自然氧化，培养时也请尽量遮光。
(溶解后请务必用铝箔等遮光)。 荧光强度弱的情况下，即使反应时间延长，背景也会变高，所以不推荐。 因此，建议调整设备 (荧光观察)的条件。 1.增强激发光的强度。 2.延长曝光时间。 |
| Q5：悬浮和贴壁细胞都可以使用Liperfluo染色吗？是否可以染色固定细胞 |
| A5:悬浮和贴壁细胞，都可以使用。
有实验经验的：HL-60细胞(悬浮细胞)，CHO细胞·SH-SY5Y细胞(贴壁细胞)等，固定的细胞不能染色。 |
参考文献
| 细胞种类 | 诱导剂 | 抑制剂 | Liperfluo终浓度和培养时间 | 检测仪器 | 期刊名 | 出版年 | 影响因子 | 论文题目(含原文链接) | 开放获取 |
| B16细胞(小鼠黑色素瘤细胞); HT-1080(人纤维肉瘤细胞) | Erastin; RSL3; IFNγ | Ferrostatin-1; Liproxstatin-1 | 10 μM; 37℃ 30 min or 1h | 流式细胞仪 | Nature | 2019 | 42.778 | CD8+ T cells regulate tumour ferroptosis during cancer immunotherapy | N |
| HBE(人支气管上皮样细胞) | RSL3 | Ferrostatin-1 | 10 μM; 30 min | 荧光显微镜 | The Journal of Clinical Investigation | 2018 | 11.864 | Pseudomonas aeruginosa utilizes host polyunsaturated phosphatidylethanolamines to trigger theft-ferroptosis in bronchial epithelium | Y |
| RAW 264.7(小鼠单核巨噬细胞白血病细胞) | RSL3 | Ferrostatin-1 | 10 μM; 30 min | 荧光显微镜 | Nature Chemical Biology | 2020 | 12.587 | Redox lipid reprogramming commands susceptibility of macrophages and microglia to ferroptotic death | N |
| MEF(小鼠胚胎成纤维细胞) | RSL3 | Liproxstatin-1 | 10 μM; 30 min | 荧光显微镜 | Nature Chemical Biology | 2016 | 12.587 | Oxidized arachidonic and adrenic PEs navigate cells to ferroptosis | N |
| NCI-ADR/Res (NAR) 人卵巢腺癌细胞 | RSL3; Arachidonic Acid | – | 10 μM; 30 min | 荧光显微镜 | Biomaterials | 2019 | 10.317 | Triggered ferroptotic polymer micelles for reversing multidrug resistance to chemotherapy | N |
| 4T1细胞(小鼠乳癌细胞) | RSL3 | – | 10 μM | 荧光显微镜 | ACS Applied Materials & Interfaces | 2019 | 8.758 | Boosting the Ferroptotic Antitumor Efficacy via Site-Specific Amplification of Tailored Lipid Peroxidation | N |
| BMDM(小鼠骨髓来源的巨噬细胞) | SiO2 & TiO2 nanoparticles | – | 20 μM | 流式细胞仪 | Particle and Fibre Toxicology | 2017 | 7.546 | SiO2 and TiO2 nanoparticles synergistically trigger macrophage inflammatory responses | Y |
| 3T3-L1 adipocytes(小鼠脂肪细胞) | GluOC(未羧基化的骨钙素) | – | – | 荧光显微镜 | Cell Death and Disease | 2018 | 6.304 | Osteocalcin triggers Fas/FasL-mediated necroptosis in adipocytes via activation of p300 | Y |
| Hacat(人永生化角质形成细胞) | 长波紫外线(UVA)照射 | – | 5 μM in PBS; 37℃ 30 min | 荧光显微镜 | Free Radical Biology and Medicine | 2017 | 6.170 | Blue light-induced oxidative stress in live skin | N |
| SH-SY5Y(人神经母细胞瘤细胞) | 24S-OHC(人24s羟基胆固醇) | – | – | 流式细胞仪 | Free Radical Biology and Medicine | 2015 | 6.170 | New aspects of 24(S)-hydroxycholesterol in modulating neuronal cell death | N |
| OEC-M1(人口腔上皮细胞) | Erastin; RSL3; 零价铁(ZVI)纳米颗粒 | Lipoxstatin, Ferrostatin-1,10-phenanthroline; DFO | 10 μM; 30 min | 荧光显微镜 | Biomaterials Science | 2018 | 6.183 | Assessment of zero-valent iron-based nanotherapeutics for ferroptosis induction and resensitization strategy in cancer cells | N |
| Murine T cells(鼠T细胞) | NKAP-deficient(NF-κB激活蛋白缺乏) | Ferrostatin-1 | 10 μM in HBSS; 37℃ 30 min | 流式细胞仪 | The Journal of Immunology | 2019 | 4.886 | Murine T Cell Maturation Entails Protection from MBL2, but Complement Proteins Do Not Drive Clearance of Cells That Fail Maturation in the Absence of NKAP | Y |
| THP-1(人髓系白血病单核细胞);(1×105 cells/mL) | AAPH(2,2′-偶氮二异丁基脒二盐酸盐) | H2 gas(氢气) | 5 μM; 30 min | 流式细胞仪 | Scientific Reports | 2016 | 3.998 | Molecular hydrogen regulates gene expression by modifying the free radical chain reactiondependent generation of oxidized phospholipid mediators | Y |
| PMVECs(肺微血管内皮细胞) | LPS(脂多糖) | Prdx6-D140A-knock-in mice | 10 μM; 30 min | 荧光显微镜 | Lung Cellular and Molecular Physiology | 2019 | 4.406 | Genetic inactivation of the phospholipase A2 activity of peroxiredoxin 6 in mice protects against LPS-induced acute lung injury | Y |
| HepG2(人肝癌细胞) | AAPH(2,2′-偶氮二异丁基脒二盐酸盐) | – | 10 μM; 30 min | 荧光显微镜 | Journal of Agricultural and Food Chemistry | 2019 | 4.192 | Novel Fluorescence-Based Method To Characterize the Antioxidative Effects of Food Metabolites on Lipid Droplets in Cultured Hepatocytes | N |
| 4T1细胞(小鼠乳癌细胞); HT1080(人纤维肉瘤细胞) | WO3/Pt nanoparticles | – | 20 μM; 37℃ 30 min | 荧光显微镜 | Nanotechnology | 2016 | 3.551 | WO3/Pt nanoparticles promote light-induced lipid peroxidation and lysosomal instability within tumor cells | N |
| SH-SY5Y(人神经母细胞瘤细胞) | AAPH(2,2′-偶氮二异丁基脒二盐酸盐) | – | 20 μM; 37℃ 15 min | 荧光显微镜/流式细胞仪 | RSC Advances | 2012 | 3.119 | A novel fluorescent probe with high sensitivity and selective detection of lipid hydroperoxides in cells | N |
| Burkitt’s Lymphoma(Burkitt淋巴瘤细胞) | Artesunate(青蒿琥酯); Erastin | DFO; Liproxstatin-1; Ferrostatin-1 | 5 μM in PBS; 37℃ 30 min | 流式细胞仪 | Biochemical and Biophysical Research Communications | 2019 | 2.985 | Artesunate activates the ATF4-CHOP-CHAC1 pathway and affects ferroptosis in Burkitt’s Lymphoma | N |
| Horse breed stallions(种马精子) | UV light; Fe | – | 1 μM; 37℃ 30 min | 流式细胞仪 | Animal Reproduction Science | 2019 | 1.660 | Effects of media and promoters on different lipid peroxidation assays in stallion sperm | N |
| Human hair(人头发) | UV radiation | – | – | 荧光显微镜 | Cosmetics | 2018 | – | Mechanism of Cuticle Hole Development in Human Hair Due to UV-Radiation Exposure | Y |
| HeLa(人宫颈癌细胞) | BFA, Erastin | Ferrostatin-1; Liproxstatin-1 | 5 µM | 荧光显微镜 | Communications Biology | 2018 | 4.165 | Golgi stress mediates redox imbalance and ferroptosis in human cells | Y |
| THP-1(人髓系白血病单核细胞) | TBHB(叔丁基过氧化氢) | H2 gas(氢气) | 5 µM; 30 min | 流式细胞仪 | Canadian Journal of Physiology and Pharmacology | 2019 | 1.946 | Molecular hydrogen suppresses free radical-induced cell death by mitigating fatty acid peroxidation and mitochondrial dysfunction | N |
| HEI-OC1(耳蜗毛细胞) | RSL3 | DFO; Liproxstatin-1; Ferrostatin-1 | 5 μM; 37℃ 30 min | 荧光显微镜 | Journal of Cellular and Molecular Medicine | 2020 | 4.486 | Inhibition of ferroptosis protects House Ear Institute-Organ of Corti 1 cells and cochlear hair cells from cisplatin-induced ototoxicity | Y |
| SH-SY5Y(人神经母细胞瘤细胞) | 6-OHDA | Ferrostatin-1 | 5 μM; 37℃ 30 min | 荧光显微镜 | Molecular Neurobiology | 2020 | 4.500 | Activation of p62-Keap1-Nrf2 Pathway Protects 6-Hydroxydopamine-Induced Ferroptosis in Dopaminergic Cells | Y |
| HEI-OC1(耳蜗毛细胞);鼠新生耳蜗毛细胞 | RSL3 | Liproxstatin-1 | 5 μM; 37℃ 30 min | 荧光显微镜 | Oxidative Medicine and Cellular Longevity | 2020 | 5.076 | Liproxstatin-1 Protects Hair Cell-Like HEI-OC1 Cells and Cochlear Hair Cells against Neomycin Ototoxicity | Y |
| BV2 Microglial(小鼠小胶质细胞) | GQDs(石墨烯量子点) | DFO; Liproxstatin-1; Ferrostatin-1 | 10 μM; 37℃ 30 min | 荧光显微镜 | Particle and Fibre Toxicology | 2020 | 7.546 | Induction of ferroptosis in response to graphene quantum dots through mitochondrial oxidative stress in microglia | Y |
| HL-60(人骨髓细胞白血病细胞) | RSL3 | – | 10 µM; 1 h | 荧光显微镜 | Cell Death and Differentiation | 2020 | 10.717 | Oxygenated phosphatidylethanolamine navigates phagocytosis of ferroptotic cells by interacting with TLR2 | Y |
| Brain slices from LN229TAZ(4SA)(人脑胶质瘤切片) | CD45- | – | 10 μM; 37℃ 4 h | 荧光显微镜 | Nature Communications | 2020 | 12.121 | Neutrophil-induced ferroptosis promotes tumor necrosis in glioblastoma progression | Y |
| BeWo(人胎盘绒膜癌细胞) | PLA2G6敲除; GPX4敲除 | – | 10 μM; 37℃ 30 min | 荧光显微镜 | Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America | 2020 | 9.412 | PLA2G6 guards placental trophoblasts against ferroptotic injury | N |
| B16-F10(小鼠皮肤黑色素瘤细胞) | Erastin | – | 10 μM; 37℃ 30 min | 流式细胞仪 | iScience | 2020 | 4.447 | Chemically Programmed Vaccines: Iron Catalysis in Nanoparticles Enhances Combination Immunotherapy and Immunotherapy-Promoted Tumor Ferroptosis |
Y |
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特点：
● 细胞、组织样品均可检测
● 操作更加简单
● 试剂盒稳定性高
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NO.1. Liperfluo 细胞脂质过氧化物检测
NO.2. FerroOrange 细胞亚铁离子检测
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NO.4. ROS Assay Kit -Highly Sensitive DCFH-DA- ROS检测
NO.5. Calcein-AM/PI Double Staining Kit 活死细胞双染检测
概述
谷胱甘肽 (γ-L-谷氨酰-L-半胱氨酰-甘氨酸) 是体内的一种三肽化合物，它参与抗氧化和药物代谢的过程，还是谷胱甘肽过氧化物酶、谷胱甘肽S-转移酶、巯基转移酶等的底物。谷胱甘肽通常以还原型状态(GSH) 存在，但是GSH在氧化应激的作用下会转化为氧化型状态 (GSSG)。因此GSH/GSSG的比值被认为是氧化应激研究的一个重要指标。
优势
1）可以进行氧化型谷胱甘肽（GSSG）、还原型谷胱甘肽（GSH）的分类定量。
2）操作简单，且可以同时检测多个样品。
操作步骤
详见说明书
注意事项
试剂开封后各溶液的保存方法及保存时间
Substrate Working Solution：溶解后在-20℃可保存2个月
GSH Standard Solution：溶解后在-20℃可保存2个月
GSSG Standard Solution：溶解后在-20℃可保存2个月
Enzyme Working Solution：稀释后在4℃可保存2个月
Coenzyme Working Solution：用超纯水溶解后在-20℃可保存2个月
Masking Solution：用乙醇溶解后在4℃可保存2个月
其他材料
酶标仪（405或415 nm）、20 µl和200 µl移液器，多通道移液器、 96孔板、 5-磺基水杨酸 (SSA) 溶液 （点击购买）、 乙醇
常见问题Q&A
| Q1:如何计算GSH浓度？ |
| A1:根据标准曲线得到总谷胱甘肽（GSH+GSSG）的浓度，使用以下公式计算GSH浓度。 GSH浓度=总谷胱甘肽浓度-GSSG浓度×2 GSSG（氧化型谷胱甘肽）相当于两分子的GSH（还原型谷胱甘肽）。 因此，通过将GSSG浓度加倍从而得到GSH浓度。 |
| Q2:是否可以通过添加Masking Reagent来掩盖源自GSSG的GSH？ |
| A2:加入酶/辅酶之后，由GSSG产生的GSH先与DTNB反应，而还原为GSSG。GSSG生成的GSH不会被屏蔽。 |
| Q3:本试剂盒与谷胱甘肽定量试剂盒（货号：T419）有什么区别？ |
| A3:本试剂盒可以分别检测GSSG和GSH，而总谷胱甘肽定量试剂盒（T419）则无法实现。作为氧化应激指标的GSH和GSSG的比例更加受引研究人员关注。 |
| Q4:显色效果弱怎么办？ |
| A4:考虑以下原因：
原因1）本试剂盒的测量范围是0.5 μmol/l及以上，测量样品中所含的谷胱甘肽的量可能小于该值。 对策）本试剂盒无法测量不符合测量范围的样品，请考虑其他方法检测。例如HPLC方法。 也可以通过降低预处理的稀释率或增加样品量来增加检测样品的浓度。 注意：为了加强显色效果而延长显色时间，则无法获得标准曲线。 原因2）可能含有抑制荧光的物质。例如：与SH基团反应的化合物（马来酰亚胺）会干扰测量结果。 对策）由于无法通过预处理等去除这些化合物，因此请在不含有此类物质的情况下再检测。 原因3）反应中的pH值低，有可能抑制显色。 对策）1、测量时，请确保SSA浓度为1％或更低。当SSA浓度为1％或更高时，会抑制显色效果。 2、如果含有其他酸性物质，则在测量前用三乙醇胺等将其中和至pH 7，或将它们稀释至约1％或更低的酸浓度下进行反应。 |
| Q5:该试剂盒可以检测多少样品？ |
| A5:本试剂盒可以进行100次检测（使用1块96孔板） 当n=3时，可以检测9个样品。（样品未染色） 如果仅测量谷胱甘肽的总量，可以检测25个样品。 样品的布局例：通道1～6是GSSG浓度测定，通道7～12是总谷胱甘肽浓度测定。
|
| Q6:样品中有大量谷胱甘肽，如何稀释样品？ |
| A6:用0.5％5-磺基水杨酸（SSA）水溶液稀释。 测量时样品中的SSA浓度应为0.5至1％。 如果SSA浓度高，则反应过程中的pH值会呈酸性，这可能会影响吸光度。 |
| Q7:通过测量GSSG与GSH的比例可以得到什么？ |
| A7:谷胱甘肽通常在体内以还原形式（GSH）存在， 因为它通过刺激（例如氧化应激）转化为氧化形式（GSSG） GSH与GSSG之比是氧化应激的指标。 |
参考文献
1) ER Stress Cooperates with Hypernutrition to Trigger TNF-Dependent Spontaneous HCC Development,Cancer Cell,2014,26, 331–343
2) Rhythmic oscillations of the microRNA miR-96-5p play a neuroprotective role by indirectly regulating glutathione levels,Nature Communications,2014,5,3823
3) Phospholipid methylation controls Atg32-mediated mitophagy and Atg8 recycling,The EMBO Journal,2015,34(21),2703–2719
4) Administering xCT inhibitors based on circadian clock improves antitumor effects,Cancer Research,2017,77(23),6603-6613
5) Cold stress-induced ferroptosis involves the ASK1-p38 pathway,EMBO reports,2017,18(11),2067-2078
6) Chloroplast DNA Replication Is Regulated by the Redox State Independently of Chloroplast Division in Chlamydomonas reinhardtii,Plant Physiology,2013,161,2102–2112
7) Oxidative stress inhibits healthy adipose expansion through suppression of SREBF1-mediated lipogenic pathway,Diabetes,2018,67(6),1113-1127
8）Endogenous reactive oxygen species cause astrocyte defects and neuronal dysfunctions in the hippocampus: a new model for aging brain,Aging Cell,2017,16,39–51
9) Ubiquinol-10 Supplementation Activates Mitochondria Functions to Decelerate Senescence in Senescence-Accelerated Mice,Antioxidants & Redox Signaling,2014,20(16),2606-2620
10) Skeletal muscle-specific eukaryotic translation initiation factor 2α phosphorylation controls amino acid metabolism and fibroblast growth factor 21-mediated non-cell-autonomous energy metabolism,
The FASEB Journal,2016,30(2),798-812
11) Riluzole exerts distinct antitumor effects from a metabotropic glutamate receptor 1-specific inhibitor on breast cancer cells,Oncotarget,2017,8(27),44639-44653
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产品概述
硒蛋白谷胱甘肽过氧化物酶4（GPX4）是铁死亡的主要调节剂，铁死亡是铁依赖性脂质过氧化诱导的程序性细胞死亡的一种形式（1,2）。GPX4 将脂质氢过氧化物转化为无毒脂质醇，从而防止了铁锈病（2）。研究表明，硒可增强 GPX4 表达并抑制铁传染性死亡以保护神经元（3）。另外，某些抗治疗性癌细胞依靠 GPX4 存活。GPX4 的丢失会导致铁死亡，从而防止小鼠肿瘤复发（4）。此外，由 GPX4 介导的氧化还原稳态对于激活胞质 DNA 感应 cGAS-STING 通路和随后的先天免疫应答（5）的启动是必不可少的。
1.Wenzel, S.E. et al. (2017) Cell 171, 628-641.e26.
2.Bersuker, K. et al. (2019) Nature 575, 688-92.
3.Alim, I. et al. (2019) Cell 177, 1262-1279.e25.
4.Hangauer, M.J. et al. (2017) Nature 551, 247-50.
5.Jia, M. et al. (2020) Nat Immunol 21, 727-35.
订购指南
| 品牌 | 货号 | Clonality | Applications | Reactivity | 规格 | 价格 | 货期 |
| Abcam | ab125066 | Rabbit Monoclonal | Flow Cyt (Intra), WB, IHC-P, ICC | Mouse, Rat, Human | 10ul | 842 | 1-2周 |
| 40ul | 2412 | ||||||
| 100ul | 3985 | ||||||
| ab41787 | Rabbit Polyclonal | WB | Human | 100ug | 3225 | 3-4天 | |
| Proteintech | 67763-1-Ig | Mouse Monoclonal | IF, IHC, WB, ELISA | Human, mouse, rat, rabbit, pig | 50ul | 1175 | 3-4天 |
| 100ul | 1850 | ||||||
| 150ul | 2570 | ||||||
| Novus | NBP2-75511 | Rabbit Monoclonal | WB, IHC, IHC-P | Human、Mouse、Rat、Zebrafish | 100ul | 3707 | 4-6周 |
| NBP2-54979 | Rabbit Polyclonal | IHC, IHC-P | Human、Mouse、Rat | 25ul | 2238 | ||
| 100ul | 5543 | ||||||
| NBP2-76933 | Rabbit Polyclonal | WB, Flow, ICC/IF, IHC, IHC-P | Human、Mouse、Rat | 100ul | 3707 | ||
| CST | 52455S | Rabbit Polyclonal | WB | Human、Mouse、Monkey | 100ul | 3082 | 3-4周 |
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特点：
● 可用荧光酶标仪高通量筛选
产品概述
胱氨酸(Cystine)是抗氧化物质谷胱甘肽(GSH)的来源，在细胞内的氧化还原平衡中发挥着重要的作用。在癌症研究领域，Sulfasalazine、Erastin等xCT(胱氨酸/谷氨酸反向转运体)抑制剂可以改变细胞内的氧化应激平衡，进而引发细胞死之一的铁死亡。而在免疫研究领域，据报道，巨噬细胞和中性粒细胞在免疫刺激剂的作用下，xCT的表达会增高并增加细胞内的GSH水平，以平衡自身出于攻击癌细胞目的所释放的ROS。因此，无论是对癌细胞的研究还是免疫细胞的研究都离不开胱氨酸摄取能力这一重要指标。
检测原理
试剂盒内含的胱氨酸类似物(Cystine Analog, CA)与胱氨酸一样可以通过xCT的转运进入细胞内。细胞裂解后通过添加Reducing Agent还原CA并与检测试剂FOdA特异性反应，生成可产生荧光的物质。[专利申请中]
检测实例
xCT抑制剂Sulfasalazine, Erastin的抑制效果评价
使用本试剂盒对xCT抑制剂Sulfasalazine和Erastin的抑制效果进行评价。荧光结果显示，两种抑制剂均对胱氨酸的摄取有明显的抑制作用。
与传统方法比较
以往在胱氨酸摄取检测时一般采用同位素示踪法，下面是本试剂盒与同位素示踪法结果的比较。
常见问题Q&A
| Q1：氨基酸类似物(CA)具体是通过哪种转运体进入细胞内的？ |
| A1：Cystine Analog是通过胱氨酸/谷氨酸转运体(xCT)进入细胞内的。 |
| Q2：目前有检测实绩的细胞有哪些？ |
| A2：下列细胞都有检测实绩：人胶质母细胞瘤细胞, A172
人类肺泡基底上皮细胞, A549 人恶性黑色素瘤细胞, A375 人结肠癌细胞, HCT116 人肝癌细胞, HepG2 人早幼粒白血病, HL60 人纤维肉瘤细胞, HT1080 小鼠胚胎成纤维细胞, MEF 人小细胞肺癌细胞, SBC-5 人胶质瘤细胞, U-251 MG |
| Q3：氨基酸类似物(CA)进入细胞后会被分解、代谢掉吗？ |
| A3：氨基酸类似物(CA)的构造非常稳定，实验范围内的操作不会被分解或代谢。 |
| Q4：可以用这个试剂盒进行定量检测胱氨酸吗？ |
| A4：本试剂盒不是胱氨酸定量检测试剂盒。 |
| Q5：可以用这个试剂盒对进入细胞内的胱氨酸定量检测吗？ |
| A5：不能定量检测进入细胞内的胱氨酸，本试剂盒是针对细胞摄取胱氨酸能力的数值化检测试剂盒。 |
| Q6：观察不到荧光变化的时候，应该怎么办？ |
| A6：延长CA Uptake solution与细胞的共培养时间(0.5 ~ 1 h)。 |
| Q7：背景荧光较高时，应该怎么办？ |
| A7：环境中可能有未被细胞摄取的胱氨酸类似物残存，用PBS清洗后再进行检测。 |
| Q8：配制CA Uptake solution时，除了不含胱氨酸的无血清培养基以外，还可以使用哪些Buffer？ |
| A8：检测HeLa细胞时，有过使用HBSS或含有0.1% Glucose PBS（+）进行配制的成功实例。 |
| Q9：如何用细胞数对荧光强度进行补正？ |
| A9：可以通过细胞核染色试剂进行补正。也可以使用同仁化学研究所的 Cell Count Normalization Kit (货号C544)进行细胞数补正。 |
| Q10：一般使用哪种孔板比较好？ |
| A10：
下列厂家得孔板有过检测实绩： 公司名/ 产品名/ 货号 Ibidi/ μPlate 96 well ibiTreat black S 15/ Ib89626 AGC techno glass/ EZVIEW Glass Bottom Culture Plate LB 96well/ 5866-096 Thermo Fisher/ 96 Well Black/Clear Bottom Plate, TC Surface, Pack of 10/ 165305 |
| Q11：Cystine uptake solution可以长期保存吗？ |
| A11：CA Uptake solution无法长期保存，请提前计算好用量，务必现用现配。 |
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