N-[3′,6′-Bis(acetyloxy)-3-oxo-3H-spiro(isobenzofuran-1,9′-xanthen)-5-yl]-(1,4,7,10-tetraazacyclododecane-1-acetamide-κN1,κN4,κN7,κN10copper(2+)sulfate

CAS号：1346170-03-3(free base)

商品信息

规格

性状：                          本品为蓝色固体

纯度（HPLC）：           90%以上

荧光光谱：                    符合实验要求

处理条件

保存方法：                    0~5°C

硫化氢 (H₂S) 在舒张血管，保护细胞和调节胰岛素分泌方面具有重要的生理作用已经得到广泛的认可。 H₂S被认为是一种类似于NO和CO的气体信号分子，但在生理条件下大约80％的H₂S是以HS^–的状态存在的 (pKa=7)。HS^– 很容易转变为各种过硫化物和多硫化物。 -SulfoBiotics- HSip-1 是一种新的特异性检测H₂S的荧光探针，当和H₂S反应时会发出较强的绿色荧光。 -SulfoBiotics- HSip-1 DA可以穿透细胞膜检测细胞内的H₂S。

硫化氢 (H₂S) 在舒张血管，保护细胞和调节胰岛素分泌方面具有重要的生理作用已经得到广泛的认可。H₂S被认为是一种类似于NO和CO的气体信号分子，但在生理条件下大约80％的H₂S是以HS^–的状态存在的(pKa=7)。HS^–很容易转变为各种过硫化物和多硫化物。

-SulfoBiotics- HSip-1 是一种新的特异性检测H₂S的荧光探针，当和H₂S反应时会发出较强的绿色荧光。

-SulfoBiotics- HSip-1 DA可以穿透细胞膜检测细胞内的H₂S。

制备1 mmol/l HSip-1 DA储存液

加53 ul DMSO至含有50 ug HSip-1 DA的管子中，用移液器吹打溶解。

*配制好的溶液请在-20℃保存，可以保存1个月

E x：470 ～ 500 nm

Em：500 ～ 550 nm

用HSip-1 DA检测硫化氢的荧光成像

1. 在 u-slide 8孔板 (ibidi)中接种HeLa细胞，并在37℃,5%的CO₂培养箱中过夜培养。

2. 更换培养基，用无血清的MEM培养基清洗细胞2次。

3. 用无血清的MEM培养基稀释1 mmol/l 的HSip-1 DA储存液，制成5 umol/l 的HSip-1 DA工作液。

* 请根据细胞种类优化HSip-1 DA的终浓度。

4. 在细胞中加入200 ul 5 umol/l的 HSip-1 DA工作液，并在37℃ 5%的CO₂培养箱中培养30 min。

5. 去除上清液，用HBSS清洗细胞2次。

6. 在每孔中加入200 ul 200 umol/l 的Na2S溶液，并在37℃ 5%的CO₂培养箱中培养30 min。

7. 去除上清液，用HBSS清洗细胞2次。

8. 加入200 ul HBSS，用共聚焦荧光显微镜观察细胞。

用HSip-1 DA检测HeLa细胞 (经过Na₂S处理) 中的硫化氢

(A: Control, B: 用200 umol/l Na₂S 处理)

     

1) Sasakura, et al., Development of a Highly Selective Fluorescence Probe for Hydrogen Sulfide,J. Am. Chem. Soc., 2011, 133, 18003-18005

2) Kenjiro Hanaoka, et al., Discovery and Mechanistic Characterization of Selective Inhibitors of H2Sproducing Enzyme: 3-Mercaptopyruvate Sulfurtransferase (3MST) Targeting Active-site Cysteine Persulfide, Scientific Reports, 2017, 7, 40227

N-​[3′,​6′-Dihydroxy-​3-​oxo-3H-spiro(isobenzofur​an-​1,​9′-​xanthen)-​5-​yl]​-​(1,​4,​7,​10-​tetraazacyclododecan​e-​1-​acetamide-​κN1, κN4, κN7, κN10) ​copper(2+) sulfate

CAS号：1346220-52-7(free base)

商品信息

规格：

性状：                          本品为褐色固体

纯度（HPLC）：           90%以上

处理条件

保存方法：                    0~5°C

硫化氢 (H₂S) 在舒张血管，保护细胞和调节胰岛素分泌方面具有重要的生理作用已经得到广泛的认可。 H₂S被认为是一种类似于NO和CO的气体信号分子，但在生理条件下大约80％的H₂S是以HS-的状态存在的 (pKa=7)。HS- 很容易转变为各种过硫化物和多硫化物。 -SulfoBiotics- HSip-1 是一种新的特异性检测H₂S的荧光探针，当和H2S反应时会发出较强的绿色荧光。 -SulfoBiotics- HSip-1 DA可以穿透细胞膜检测细胞内的H₂S。

硫化氢 (H₂S) 在舒张血管，保护细胞和调节胰岛素分泌方面具有重要的生理作用已经得到广泛的认可。

H₂S被认为是一种类似于NO和CO的气体信号分子，但在生理条件下大约80％的H₂S是以HS^–的状态存在的(pKa=7)。

HS-很容易转变为各种过硫化物和多硫化物。

-SulfoBiotics- HSip-1 是一种新的特异性检测H₂S的荧光探针，当和H₂S反应时会发出较强的绿色荧光。

-SulfoBiotics- HSip-1 DA可以穿透细胞膜检测细胞内的H₂S。

制备10 mmol/l HSip-1储存液，加117 ul超纯水至含有1 mg HSip-1的管子中，用移液器吹打溶解。

*配制好的溶液请在-20℃保存，可以保存1个月。

Ex： 470 ～ 500 nm

Em：500 ～ 550 nm

一. 用HSip-1检测硫化氢

1. 用PBS稀释10 mmol/l HSip-1储存液，制成200 umol/l的 HSip-1工作液。

2. 用1 ml 充氮处理过的超纯水溶解7.8 mg Na₂S制成 100 mmol/l Na₂S溶液。

3. 吸取20 ul 100 mmol/l 的Na₂S溶液至980 ul超纯水中，制成2 mmol/l 的Na₂S溶液。

4. 吸取100 ul 2 mmol/l 的Na₂S溶液至900 ul超纯水中，制成200 umol/l 的Na₂S溶液。

5. 用超纯水稀释200 umol/l 的Na₂S溶液，制成一个系列浓度的 (200 umol/l, 100 umol/l,

50 umol/l, 25 umol/l, 12.5 umol/l, 6.3 umol/l, 3.2 umol/l, 0 umol/l) 的Na₂S标准溶液。

6. 吸取350 ul 200 umol/l的 HSip-1工作液至300 ul的Na₂S溶液中，并用涡旋振荡器振荡混匀。

7. 上述溶液在室温培养30 min后，转移至96孔板中 (200 ul/孔)。

8. 用荧光酶标仪测定在516 nm (ex=491 nm)的荧光强度。