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特点：
● 可以检测细胞、组织等多种样品
● 准确性和灵敏度高
● 可以测定100%SOD抑制率
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产品概述
超氧化物歧化酶 (SOD) 是一种重要的抗氧化酶，它可以催化超氧阴离子 (O2–) 的歧化反应，生成过氧化氢和单质氧。目前有很多种直接或间接地测量SOD活性的方法，在这些方法中，使用硝基蓝四唑 (氮蓝四唑NitroblueTetrazolium ，简称NBT) 的一种间接测量方法因其便捷、简单的使用方法而被广泛应用。但是NBT法存在一些缺点，例如生成的甲臜 (Formazan dye) 的水溶性较低，会和黄嘌呤氧化酶的还原型发生反应等问题。SOD检测试剂盒-WST®提供了更为简便的检测SOD的方法，它是利用同仁学研究所研发的高度水溶性四唑盐WST®-1(2-(4-碘苯基)-3-(4-硝基苯)-5-(2,4-二磺酸苯基)-2氢-四唑盐,二钠盐)，能与超氧阴离子(O2–) 反应生成一种水溶性的染料。WST®-1被超氧阴离子还原的比率与黄嘌呤氧化酶的活性线性相关，并且会被SOD所抑制 (见下图，即红色区域SOD反应优先发生，SOD反应完后蓝色区域WST®-1反应才能发生)。因此SOD或者SOD类似物的IC50(50%的抑制浓度)就能用比色法来测定。
特点
1)可以测定100%SOD抑制率。
2)不需要甲醛溶解操作，操作简单。
3)一次可以进行多样本的测定。
4)由于灵敏度高，可以提高样品的稀释倍率，所以可以抑制干扰物质带来的影响。
检测原理
所需设备和材料
2-20 µl和20-200 µl的可调式移液器、多通道移液器，酶标仪（450 nm）、96孔板、37℃培养箱
操作步骤
用96孔板，制作样品到检测可在1小时内完成
抑制曲线
Cu,Zn-SOD的抑制曲线
实验例
高知大学的岛村等人对石茶制作的每一步都测定了其SOD活性。据报道，在制造过程中和微生物相关的需氧发酵和厌氧发酵极大地增加了SOD样活性，并且在发酵过程中抗氧化能力随着茶提取物成分的变化而改变。
“ 石茶生产过程中儿茶素含量和超氧阴离子清除活性的变化”，日本食品科学技术学会学报，55（12），640
L： 新鲜树叶
SL： 蒸煮的树叶
PFL：预发酵（有氧条件下发酵几天）树叶
FL： 发酵（在厌氧条件下发酵数天）树叶
DL： 晒干（数天）树叶
食品抗氧化能力的检测
我们知道，许多由呼吸和各种外在因素产生的活性氧，会降低机体功能，促进各种疾病的发病和老化。
有越来越多对这此类现象的防御机制(抗氧化能力)的文章出现，关于利用食品所具有的抗氧化能力维持健康、预防疾病的研究也备受关注。
常见问题Q&A
| Q1：“1 Unit”的定义是什么？ |
| A1：1 Unit是指样品中的还原性染料（如细胞色素C，WST-1，NBT或XTT）与超氧阴离子之间的比色反应，50%被抑制时的点。例如如果不含任何SOD的样品溶液的O.D.值为1.0的话，那么另一个O.D.值为0.5的样品则被定义为具有1个单位的酶活性。可以使用这个单位来确定样品中的
SOD活性。使用不同染料或方法检测SOD活性，它们之间不具有可比性。 |
| Q2：我能使用SOD标准品来确定样品溶液的SOD活性吗？ |
| A2：可以。制备标准曲线，确定样品溶液的SOD活性。SOD Bovine Erythrocytes
（CAS# 9054-89-1，EC 1.15.1.1）能够从Sigma（Catalog# S2525）购得。 |
| Q3：是否可以用动力学法来测定SOD活性？ |
| A3：可以。因为在20分钟内的生色比率是保持一致的，可以测量直线上升阶段5分钟内的斜率来测定SOD活性。 |
| Q4：如果样品自身带有较深的颜色，这样的样品可以使用吗？ |
| A4：可以。稀释样品可以减小干扰，将样品孔的O.D.值减去Blank 2的O.D.值就可以扣除本底的颜色。但是如果样品溶液的SOD活性过低是不能检测出的。 |
| Q5：如何能够制备更多的Dilution Buffer？ |
| A5：Dilution Buffer为PBS。请按以下浓度配制：137 mM NaCl，2.7 mM KCl，
1.47 mM KH2PO4， 8.1 mM Na2HPO4，pH 7.4。 |
| Q6：使用该试剂盒能否分别检测Mn-SOD和Cu/Zn-SOD？ |
| A6：可以。要单独检测Mn-SOD活性，可以添加KCN阻断Cu/Zn-SOD活性。向样品中加入
1 mM的KCN可以完全阻断Cu/Zn-SOD活性。要测定Cu/Zn-SOD的活，可以用总的SOD活性减去Mn-SOD活性，就可以得到。 |
| Q7：怎样保存样品？ |
| A7：在-80℃可以保存1年。 |
| Q8：能否使用该试剂盒检测超氧化物阴离子的水平？ |
| A8：不必用这个试剂盒，可以使用WST-1来检测超氧化物。但是必须有一个检测样品溶液中超氧化物量的标准。因为超氧化物不稳定，而且会和其它物质反应，要确定系统中生成的超氧化物的总量是比较困难的。试剂盒中的黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶体系可以被用作检测每个样品中超氧化物相对生成量的标准。 |
参考文献
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