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Lactate Assay Kit-WST试剂盒货号:L256
乳酸检测试剂盒
Lactate Assay Kit-WST
商品信息
储存条件:0-5度保存,避光
运输条件:室温

特点:

 

● 细胞上清液和细胞样品均适用

● 操作简便

● 灵敏度高最低可检测到0.02 mmol/l的乳酸

● 试剂稳定性高

● 享有显色底物WST专利

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葡萄糖乳酸检测

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代谢检测方案

Lactate Assay Kit-WST试剂盒货号:L256 乳酸检测试剂盒

Lactate Assay Kit-WST试剂盒货号:L256 乳酸检测试剂盒

产品解说
活动进行中
试剂盒内含
概述
原理
特点
乳酸标准曲线
实验例
常见问题Q&A
参考文献

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试剂盒内含

Lactate Assay Kit-WST试剂盒货号:L256 乳酸检测试剂盒

概述

乳酸是细胞的一种主要代谢途径-糖酵解的代谢产物,也是肌肉疲劳和高乳酸血症的重要生物标志物。它还可以作为监测细胞内代谢途径变化的标志物。此外最近的代谢研究表明,乳酸是组织和癌细胞的三羧酸循环中碳的主要来源。

Lactate Assay Kit-WST®可用于定量检测糖酵解代谢产生的乳酸,并优化了定量过程。本试剂盒通过测定WST®的显色反应来定量细胞上清液中的乳酸含量,可用96孔板检测,灵敏度高,最低可检测到0.02 mmol/l的乳酸。

WST®:WST是日本同仁化学研究所的注册商标

原理

本试剂盒通过测定WST的显色反应来定量细胞上清或细胞内的乳酸含量。

另外,试剂盒中含有乳酸标准液,可以通过制备标准曲线来定量样品中的乳酸浓度。

Lactate Assay Kit-WST试剂盒货号:L256 乳酸检测试剂盒

特点

特点1:操作简单,只需要加入试剂

只需在加入细胞裂解液的细胞上清液中加入试剂,培养即可。

Lactate Assay Kit-WST试剂盒货号:L256 乳酸检测试剂盒

特点2:试剂稳定性高

Lactate Assay Kit-WST试剂盒货号:L256 乳酸检测试剂盒

乳酸标准曲线

可以从使用试剂盒中的乳酸标准液制作出乳酸标准曲线,然后通过标准曲线求出样品中的乳酸浓度。

当乳酸浓度在1 mmol/l以上时,可以通过稀释样品进行检测。

Lactate Assay Kit-WST试剂盒货号:L256 乳酸检测试剂盒

实验例

2-脱氧-D-葡萄糖对糖酵解的抑制作用 

1、在96孔板中接种1×104个/孔的HeLa细胞(MEM培养基中含有10%胎牛血清和1%青霉素-链霉素),在37℃,5% CO2培养箱中过夜培养。

2、去除上清液后,在培养基中加入100 µl配制好的系列浓度的2-脱氧-D-葡萄糖溶液。

3、在37℃,5% CO2培养箱中过夜培养。

4、培养后,吸取20 µl细胞上清液至1.5 ml微量管中,并用超纯水稀释8倍制备样品溶液,然后按照说明书的图3在每孔中加入20 µl样品溶液。

5、按照“配制乳酸标准液”的方法配制乳酸标准液。

6、在96孔板中按照说明书的图3在每孔中加入20 µl各种浓度的乳酸标准液。

7、在每孔中加入80 µl工作液。

8、在37℃培养箱中培养30 min。

9、用酶标仪测定450 nm的吸光度,并用标准曲线计算样品的乳酸浓度。

Lactate Assay Kit-WST试剂盒货号:L256 乳酸检测试剂盒

2-脱氧-D-葡萄糖对糖酵解的抑制作用,随着2-脱氧-D-葡萄糖 (一种糖酵解抑制剂)浓度的增加,乳酸浓度逐渐减少

葡萄糖和乳酸的测定例

用葡萄糖测定试剂盒(货号:G264)和乳酸测定试剂盒检测(货号:L256):检测将葡萄糖转运蛋白抑制剂Phloretin添加到Jurkat细胞时的代谢活性变化。

 

Lactate Assay Kit-WST试剂盒货号:L256 乳酸检测试剂盒

■实验条件

细胞:Jurkat细胞(5×105细胞)

药物:Phloretin(终浓度:100 µmol/l)

培养时间:过夜培养

■结果

Phloretin的添加抑制了葡萄糖的摄取,减少了葡萄糖的消耗,增加了培养基中葡萄糖的量,并减少了乳酸的量。

常见问题Q&A

Q:使用含有血清的培养基,可以测定培养上清液中的乳酸吗?
A:使用含有血清的培养基,可以测定培养上清液中的乳酸。
但是在含有血清的情况下,由于背景上升,需要测定培养基OD值并将其作为背景对照减去。
【参考数据】
含和不含10%FBS的吸光度比较

Lactate Assay Kit-WST试剂盒货号:L256 乳酸检测试剂盒

<结果>
在培养基中加入10%FBS的组吸光度大大升高,因此需要测定培养基作为背景对照。

Q:如何检测细胞内乳酸含量?
(1)用微量管收集1×105的细胞*1

(2)以300×g离心2 min后去除上清液。

(3)加入300 μl的PBS,用移液器吹打使其重悬,再以300×g离心2 min后去除上清液。
(4)加入300 μl细胞裂解液*2(0.1%Triton-X)并涡旋1 min,制成细胞裂解液。

(5)以8000×g离心5 min,收集上清液。
(6)将步骤(5)所得溶液用超滤离心管(PALL,No.OD010C3,滤膜分子量:10K)以12,000×g 离心10 min*3去除蛋白质,得到待测样品。

*1、样品为HeLa细胞时,为了检测出0.02 mmol/l以上的乳酸含量,需要1×105的细胞甚至更多。
*2、如果细胞裂解液中含有SDS会抑制显色,因此不要使用含有SDS的缓冲液。

*3、内源性乳酸脱氢酶(LDH)会导致背景增高,因此通过脱蛋白处理去除内源性乳酸脱氢酶

(LDH)。
※测定样品设定为3个复孔时(n=3),合计至少需要60 μl以上(每孔20 μl×3)。
※如果过滤后滤液不足60 μl,可适当延长过滤时间。
※稀释细胞裂解液至合适的浓度,使结果在标准曲线范围内(0-1 mmol/l)。

Q:配制后的Working   Solution稳定性如何,可以保存多久?
A:Working Solution需要现配现用。
光会影响Working Solution的稳定性,所以配制后请用铝箔纸包裹。
配制后的Working Solution在室温避光条件下可以保存4 h。
(Working Solution遇到光,溶液的颜色会由红色变为橙色,背景会升高。)
Q:为什么我的样品孔没有显色?
A:样品中的乳酸浓度可能低于检测限(0.02 mmol/l)。
乳酸浓度低于0.02 mmol/l的样品无法用该试剂盒检测,因此请考虑其他方法,如LC-MS。
如果待测样品被稀释,则稀释样品中含有的乳酸浓度可能低于0.02 mmol/l。
请降低稀释比例,从而将检测样品的乳酸浓度调整到最低检测限以上。
Q:是否可以检测含有还原性物质的样品?
A:如果样品中含有还原性的物质,则WST染料也会发生显色,此时无法准确定量乳酸浓度。
实验中如遇到以上情况,可以设定药物对照(不含细胞含药物的培养基+试剂),
并将标准品孔和样品孔的吸光度分别减去药物对照的吸光度。
Q:该试剂盒可以定量D-Lactate吗?
A:该试剂盒是用于L-Lactate的定量,不能定量D-Lactate。
Q:是否可以使用450 nm以外波长的滤光片进行检测?
A:也可以使用490 nm的滤光片, 但是吸光度会低于在450 nm处的吸光度。
Q:一个试剂盒可以检测样品的数量。
A:制备标准曲线和样品(n=3)时,可以检测的样品数量如下所示。

Lactate Assay Kit-WST试剂盒货号:L256 乳酸检测试剂盒

标准曲线:8个点(0, 0.0157, 0.0313, 0.0625, 0.125, 0.25, 0.5, 1 mmol/l)(n=3)

Lactate Assay Kit-WST试剂盒货号:L256 乳酸检测试剂盒

96孔板排列示意图(n=3)

参考文献

编号 文献名 年分 IF
1 Hypoxia-induced   exosomal circPDK1 promotes pancreatic cancer glycolysis via c-myc activation   by modulating miR-628-3p/BPTF axis and degrading BIN1 2022 23.2
2 Serine   racemase enhances growth of colorectal cancer by producing pyruvate from   serine 2020 19.9
3 YAP   mediates compensatory cardiac hypertrophy through
aerobic glycolysis in response to pressure overload
2022 19.5
4 Serine   racemase enhances growth of colorectal cancer by producing pyruvate from   serine,
Nature Metabolism,2020, 2,81–96
2020 13.5
5 Polymer-conjugated   glucosamine complexed with boric acid shows tumor-selective accumulation and   simultaneous inhibition of glycolysis, Biomaterials,2021, 269:120631 2020 12.8
6 Metabolome   Analysis Reveals Excessive Glycolysis via PI3K/AKT/mTOR and RAS/MAPK   Signaling in Methotrexate-Resistant Primary CNS Lymphoma-Derived Cells,   Clinical Cancer Research,2020, 26(11):2754-2766 2020 11.2
7 Inhibition   of glycolytic activator PFKFB3 suppresses tumor growth and induces tumor   vessel normalization in hepatocellular carcinoma 2021 9.8
8 Epigenetic silencing   of LncRNA LINC00261 promotes c-myc-mediated aerobic glycolysis by regulating   miR-222-3p/HIPK2/ERK axis and sequestering IGF2BP1 2021 8.8
9 PLEKHA5   regulates the survival and peritoneal dissemination of diffuse-type gastric   carcinoma cells with Met gene amplification, Oncogenesis,2021, 10(3):25 2021 7.5
10 An iPSC-based neural   model of sialidosis uncovers glycolytic impairment-causing presynaptic   dysfunction and deregulation of Ca2+ dynamics 2021 7.1
11 Tumor   cell-derived angiopoietin-like protein 2 establishes a preference for   glycolytic metabolism in lung cancer cells,Cancer Science,2020,   111(4):1241-1253 2020 6.7
12 Tumor cell-derived   angiopoietin-like protein 2 establishes a preference for glycolytic   metabolism in lung cancer cells 2020 6.5
13 Sodium-Glucose   Co-Transporter 2 Inhibitors Correct Metabolic Maladaptation of Proximal   Tubular Epithelial Cells in High-Glucose Conditions 2020 6.2
14 Metabolites Produced   by a New Lactiplantibacillus plantarum Strain BF1-13 Isolated from Deep   Seawater of Izu-Akazawa Protect the Intestinal Epithelial Barrier from the   Dysfunction Induced by Hydrogen Peroxide 2022 6.1
15 MicroRNA-505,   Suppressed by Oncogenic Long Non-coding RNA LINC01448, Acts as a Novel   Suppressor of Glycolysis and Tumor Progression Through Inhibiting HK2   Expression in Pancreatic Cancer 2021 6.1
16 Matrine   Promotes Human Myeloid Leukemia Cells Apoptosis Through Warburg Effect   Mediated by Hexokinase 2, Frontiers in Pharmacology,2019, 10:1069 2019 5.8
17 Mutant KRAS drives   metabolic reprogramming and autophagic flux in premalignant pancreatic cells 2021 5.8
18 Long Non-Coding RNA   TMPO-AS1 Promotes GLUT1-Mediated Glycolysis and Paclitaxel Resistance in   Endometrial Cancer Cells by Interacting With miR-140 and miR-143 2022 5.7
19 Circ_0002111/miR-134-5p/FSTL1   signal axis regulates tumor progression and glycolytic metabolism in   papillary thyroid carcinoma cells 2022 5.5
20 SIRT3-Mediated   SOD2 and PGC-1α Contribute to Chemoresistance in Colorectal Cancer Cells,   Annals of Surgical Oncology,2021, 28(8):4720-4732 2021 5.3
21 Metabolic changes in   synovial cells in early inflammation: Involvement of CREB phosphorylation in   the anti-inflammatory effect of 2-deoxyglucose 2021 4.1
22 Novel   pharmacological effects of poly (ADP-ribose) polymerase inhibitor rucaparib   on the lactate dehydrogenase pathway, Biochemical and Biophysical Research   Communications,2019, 510(4):501-507 2019 3.6
23 Neopetrosidines   A–D, pyridine alkaloids isolated from the marine sponge
Neopetrosia chaliniformis and their cell cycle elongation activity
2021 3.5
24 Novel pharmacological   effects of poly (ADP-ribose) polymerase inhibitor rucaparib on the lactate   dehydrogenase pathway 2019 3.3
25 Circ_0000442   functions as a tumor repressor in breast cancer by impacting miR-1229-3p and   upregulating ZBTB1 2020 2.5
26 Suppressive Effects   of Anisomycin on the Proliferation of B16 Mouse Melanoma Cells In Vitro 2021 2.1
27 Liver-Inspired Polyetherketoneketone Scaffolds Simulate Regenerative Signals and Mobilize Anti-Inflammatory Reserves to Reprogram Macrophage Metabolism for Boosted Osteoporotic Osseointegration 2023 15.1
28 Arresting calcium-regulated sperm metabolic dynamics enables prolonged fertility in poultry liquid semen storage 2023 4.6
29 Exosomes secreted by ST3GAL5high cancer cells promote peritoneal dissemination by establishing a premetastatic microenvironment 2023 6.6