Phusion® 高保真 DNA 聚合酶说明书

Phusion® 高保真 DNA 聚合酶

用于高速、高性能 PCR。Thermo Scientific® Phusion 高保真 DNA 聚合酶由 New England Biolabs 制造并进行质量控制，具有高保真度和强大的性能。

保真度比 Taq 高 50 倍
稳健的反应 – 以最少的优化获得最大成功
提供多种缓冲液，可针对不同 DNA 模板定制反应设置

高保真 DNA 聚合酶对于扩增后 DNA 序列需要正确的应用非常重要。其结构是一种与持续增强结构域融合的新型火球菌样酶，可提高保真度和速度。Phusion DNA 聚合酶是克隆的理想选择，可用于长或困难的扩增子。Phusion 的错误率比 Taq DNA 聚合酶低 50 倍以上，比激烈火球菌 DNA 聚合酶低 6 倍 (1)，是目前最准确的热稳定聚合酶之一。Phusion DNA 聚合酶具有 5´→ 3´ 聚合酶活性、3´→ 5´ 核酸外切酶活性，可产生平端产物。

Phusion DNA 聚合酶配有标准 5X Phusion HF 缓冲液以及 5X Phusion GC 缓冲液，可用于复杂或富含 GC 的模板。这些缓冲液均含有 MgCl2（最终 [1X] 反应浓度为 1.5 mM）。还可以使用提供的 DMSO 或 MgCl2 溶液来优化反应。

使用经 Frey & Suppman, 1995 修改的基于 lacI 的方法进行保真度测定。

使用不同的聚合酶从 50 ng Jurkat gDNA 中扩增出 3.8 kb 片段。反应按照制造商推荐的条件进行。指示延长时间（以分钟为单位）。梯子 L 是 1 kb DNA 梯子 (NEB# N3232)。

单位定义

One unit is defined as the amount of enzyme that will incorporate 10 nmol of dNTP into acid insoluble material in 30 minutes at 74°C.

贮存溶液

20 mM Tris-HCl
100 mM KCl
1 mM DTT
0.1 mM EDTA
200 µg/ml BSA
50% Glycerol
1X stabilizers
pH 7.4 @ 25°C

热失活

否

5' – 3' 核酸外切酶

No

3' – 5' 核酸外切酶

Yes

单位活性检测条件

25 mM TAPS-HCl (pH 9.3 @ 25°C), 50 mM KCl, 2 mM MgCl², 1 mM b-mercaptoethanol, 200 µM dNTPs including [³H]-dTTP and 15 nM primed M13 DNA.

特点
稳健的反应 – 以最少的优化获得最大的成功
高的保真度 – 比 Taq 高 50 倍。
高速 – 显着缩短延伸时间（比 Pfu 快 10 倍）
高产量 – 使用最少量的酶提高产物产量 多功能
– 可用于常规 PCR 以及长或困难的模板
应用特性
PCR
克隆
长或困难的扩增
高通量聚合酶链式反应