人白细胞介素 10(IL-10)ELISA试剂盒简介

人白细胞介素 10(IL-10)ELISA试剂盒简介

 用于人血清、血浆及相关液体样本中白细胞介素 10(IL-10)测定。

作原理

本试盒采用的是生物素双抗体夹心酶联免疫吸附法 (ELISA) 测定样品中 人白细胞介素 10(IL-10)水平。向预先包被了白细胞介素 10(IL-10)单克隆抗 的酶标孔中加入白细胞介素 10(IL-10),温育;温育后,加入生物素标记的 IL-10 抗。再与链霉亲和素HRP 结合,形成免疫复合物,再经过温育和洗涤, 去除未结合的酶,然后加入底物 AB,产生蓝色,并在酸的作用下转化成最终 的黄色。颜色的深浅与样品中白细胞介素 10(IL-10)的浓度呈正相关。

试剂盒组成

试剂盒组成

48 孔配置

96 孔配置

说明

1

1

封板膜

2 (48)

2 (96)

封袋

1

1

标包被板

1 ×48

1 ×96

2-8℃保存

标准品 400 ng/L

0.5ml×1

0.5ml×1

2-8℃保存

准品稀释液

3ml×1

6ml×1

2-8℃保存

霉亲和素HRP

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

物素标记的抗 IL10 抗体

0.5ml×1

1 ml×1

2-8℃保存

显色剂 A

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

色剂 B

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

止液

3ml×1

6ml×1

2-8℃保存

浓缩洗涤液

(20ml×20 ) × 1

(20ml×30 ) × 1

2-8℃保存





















需要而未提供的试剂和器材

1  37℃恒温箱。

2.  标准规格酶标仪

3.  精密移液器及一次性吸头

4.  蒸馏水,

5  一次性试管

6  吸水纸

意事项

1.  从 2-8℃取出的试剂盒,在开启试剂盒之前要室温平衡至少 30 分钟。酶标包 板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。

2  各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差

3. 严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

4  为避免交叉污染,要避免重复使用手中的吸头和封板膜。

5.  不用的其试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。

6.  底物 B 对光敏感,避免长时间暴露于光下。

板方法

工洗板方法:甩掉酶标板内的液体;在实验台上铺垫几层吸水纸,酶标板朝下 用力拍几次;将稀释后的洗涤液至少 0.35ml注入孔内,浸泡 1-2 分钟。根据需 要,重复此过程数次

洗板:如果有自动洗板机,应在熟练使用后再用到正式实验过程中

标本要求


1不能检测含NaN3 的样品,因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的 (HRP) 活性。

2.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实 验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融。

作程序

1. 标准品的稀释: (本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小

试管中进行稀释。)

200 ng/L

5 号标准品

120 μ l 的原倍标准品加入 120 μ l 标准品稀释液

100 ng/L

4 号标准品

120 μ l 的 5 号标准品加入 120 μ l 标准品稀释液

50 ng/L

3 号标准品

120 μ l 的 4 号标准品加入 120 μ l 标准品稀释液

25ng/L

2 号标准品

120 μ l 的 3 号标准品加入 120 μ l 标准品稀释液

12.5 ng/L

1 号标准品

120 μ l 的 2 号标准品加入 120 μ l 标准品稀释液

2. 根据代测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空 孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。

3. 样:1) 空白孔,空白对照孔不加样品,生物素标记的抗 IL-10 抗体,链 亲和素HRP,只加显色剂 A&B 和终止液,其余各步操作相同2) 标准品 孔:标准品 50ul,链霉亲和素HRP50ul(标准品中已事先整合好生物素 抗体,故不加);3) 代测样品孔:加入样本 40ul,然后各加入 IL-10 抗体 10ul链霉亲和素HRP50ul,盖上封板膜,轻轻震荡混匀,37℃温育 60 分 钟。

 4. 配液:将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用。

5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30 秒后 弃去,如此重复 5 次,拍干。

6. 显色:每孔先加入显色剂A50ul,再加入显色剂 B50 μ l,轻轻震荡混匀,37℃ 避光显色 15 分钟.

 7. 终止:每孔加终止液 50 μ l终止反应 (此时蓝色立转黄色)。

 8. 测定:以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度 (OD 值) 。  测定应 在加终止液后 10 分钟以内进行。

 9. 根据标准品的浓度及对应的OD 值计算出标准曲线的直线回归方程,再根据 OD 值在回归方程上计算出对应的样品浓度。也可以使用各种应用软 来计算。

操作程序总结:

1.准备试剂,样品和标准品

2.加入准备好的样品和标准品,生物素标记的二抗和酶标试剂,37℃反应60分钟

3.洗板5次,加入显色液A、B,37℃显色15分钟

4.加入终止液

5.10分钟内读OD值

6.计算

检测范围:6ng/L →200 ng/L

存:2-8℃。

有效期:6 个月(2-8℃)。