植物原生质体分离与转化试剂盒I(PEG法)

植物原生质体分离与转化试剂盒I(PEG法)

货号: JP7381-40T 品牌: Jinpan 标签: 细胞生物学研究

描述

Plant Protoplast Isolation and Transformation Kit I (PEG-Mediated) 

植物原生质体分离与转化试剂盒I(PEG法)

 

产品变更声明:

①   为了更清晰说明本试剂盒的用途,现将本试剂盒更名为:原生质体分离与转化试剂盒(英文名:Plant Protoplast Isolation and Transformation Kit)。

②   本试剂盒对于大多数的样本(0.1g叶片)用5ml酶反应体系足够,因此产品规格由原来的20T(按照10ml酶反应体系)更新为:40T(按照5ml酶反应体系)。

③  两款试剂盒选择上的考虑:

A)试剂盒I:含植物原生质体制备(不包含消化酶)和植物转化需要的所有试剂,需用户自行准备消化酶。由于不同植物样本,在原生质体制备消化酶的搭配组合上有所差异,特别是富含纤维素或果胶的特殊样。此类样本的用户推荐单独购买酶,自行优化最佳的酶消化组合,以获得高质量的原生质体。我司提供完整的几款植物消化酶:

纤维素酶R-10(JP7352);离析酶R-10(JP7351);纤维素酶RS(JP7353);果胶酶Y-23(JP7354);半纤维素酶(JP7358);崩溃酶(JP7355);几丁质酶(JP7357);

B)试剂盒II:含植物原生质体制备(包含消化酶和细胞筛网)和植物转化需要的所有试剂,此试剂盒包含纤维素酶R-10和离析酶R-10,适用于绝大多数植物样本(比如:拟南芥)。

 

产品关键词:

Plant Protoplast 植物原生质体;PEG-mediated protoplast transformation 聚乙二醇介导的原生质体转化;Yakult Honsha;Cellulase R-10 纤维素酶R-10;Macerozyme R-10 离析酶R-10;二乙酸荧光素 (FDA) 原生质体活力检测;

产品信息                                                                                                            

产品名称

产品编号         规格         价格(元)
植物原生质体分离与转化试剂盒I(PEG法) JP7381-40T 40T

848

【温馨提示I】:见我司(JP)整理的植物细胞壁降解酶/消化酶产品专题

【温馨提示II】:如果需要含消化酶和细胞筛网的试剂盒,可选择原生质体转化试剂盒II(PEG法),也可以单买这几个组分,我司皆有供应。

产品描述

原生质体(Protoplast)是指植物细胞去掉细胞壁后的裸露部分,体外培养条件下,具有以下功能:1)具全能型,可再生细胞壁,进行连续的细胞分裂且能再生成完整植株的能力;2)具摄取外源大分子、细胞器,以及细菌、病毒的能力,从而原生质体是进行遗传操作,基因转移的良好材料;3)通过同种和异种植物的原生质体融合,可产生异核体,实现体细胞杂交,从而培育出具有抗病原或更高产量的新品种。

原生质体(Protoplast)的制备最主流的技术是酶解法,因其具有消化温柔,操作简单,且良好维持原生质体完整性的特点。工作原理是根据植物细胞壁的结构特征选择合适的酶进行处理,植物细胞壁主要由多糖(纤维素、半纤维素、果胶等)以及少量的蛋白和脂质构成。因此,通过使用纤维素酶、离析酶、半纤维素酶、果胶酶等复合酶来降解细胞壁,即可得到原生质体。

原生质体(Protoplast)的转化方法很多,主要有PEG介导转化法、电击穿孔转化法、脂质体介导转化法、农杆菌共培养转化法等。

本试剂盒利用的是PEG介导的原生质体转化法,操作简单和便捷。试剂盒含有植物原生质体制备(不包含消化酶)和植物转化需要的所有试剂。原生质体制备,按照单次5ml酶液体系来算,可做40次酶消化反应;原生质体转化,按照每次转化100μl原生质体溶液,可做至少40次转化。

试剂盒组分

组分编号       组分名称 规格(20T)    储存方法       
JP7381-A Solution A-Enzyme solution buffer (2×)溶液A      100ml -20℃保存
JP7381-B Solution B-W5 solution溶液B 200ml -20℃保存
JP7381-C Solution C-MMG solution溶液C 25ml -20℃保存
JP7381-D Solution D-Transformation solution溶液D 2.5ml -20℃保存
JP7381-E Solution E-WI solution溶液E 25ml -20℃保存
JP7381-F Solution F-Reduced reagent溶液F 1ml RT保存
JP7381-G Solution G-BSA solution (50mg/ml) 5ml -20℃保存

 

保存与运输方法

保存:按照说明书要求对各组分进行归位保存,1年有效。

运输:室温运输。

注意事项

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

一、需要准备材料

1.1    离析酶R-10(比如,Cat#:JP7351-1G, JP)

1.2    纤维素酶R-10(比如,Cat#:JP7352-1G, JP)

1.3    70μm细胞筛网(比如,Cat#:352350, BD Bioscience)

1.4    平头镊子

1.5    一次性刀片

1.6    1.5ml离心管

1.7    50ml离心管

1.8    恒温加热水浴锅

二、原生质体分离

2.1 按照以下表格体系,配制即用型酶溶液:【注意:此溶液现配现用】

组分

10ml配制量          50ml配制量        

溶液A (2×酶溶解液)

5ml 50ml

离析酶R-10

40mg 200mg

纤维素酶R-10

150mg

750mg

溶液F(还原剂) 5 μl

25μl

溶液G(50mg/ml BSA) 0.2ml

1ml

无菌水 定容到10ml

定容到50ml

2.2 取生长状态良好的叶片切成0.5-1mm的小条,按照20个叶片加10ml即用型酶溶液的比例迅速将切好的叶片小条浸泡于即用型酶溶液内,室温避光酶解3h。

【注意】:酶解时间与叶片类型、叶片生长状态有关,请根据实际实验进行调整。酶溶液变为绿色表明原生质体已经分离,显微镜镜检确定是否分离。

2.3 酶解后加入10ml溶液B,轻柔混匀。

2.4 用70μm细胞筛网过滤步骤2.3获得的溶液,去除未消化的叶片和杂质,收集滤液到50ml离心管内。

2.5 滤液于100×g,室温离心2min,吸掉上清。

2.6 加1ml溶液B重悬原生质体,冰浴30min,使得原生质体自然沉淀到底部。

2.7 小心吸掉上清,不要触动原生质体沉淀。将沉淀重悬于1ml溶液C,即得到原生质体溶液。

三、原生质体转化

3.1 取10μl质粒DNA(浓度为1-2μg/μl)于1.5ml离心管。

3.2 加入100μl原生质体溶液,轻柔混匀。

3.3 加入等体积(110μl)溶液D,轻柔完全混匀,室温孵育15min,间歇轻柔混匀。

3.4 加入2倍体积(440μl)溶液B,轻柔完全混匀,终止转化过程。

3.5 于100×g,室温离心2min,吸掉上清。

3.6 将沉淀重悬于1ml 溶液E中。

四、原生质体培养和收集

4.1 原生质体溶液室温孵育2-16h。

【注意】:根据特定实验确定孵育时间。RNA分析一般孵育2-6h;酶活性分析和蛋白标记一般孵育2-16h。

4.2 于100×g,室温离心2min收集原生质体,去掉大部分上清。

4.3 原生质体沉淀重悬于剩余溶液中,-80℃保存。

 

文献引用:  

1)Xue LJ et a al.Two antagonistic effect genes mediate separation of sexes in a fully dioecious plant. https://doi.org/10.1101/2020.03.15.993022

  Isolation of Populus mesophyll protoplasts was performed using the PEG-Mediated plant protoplast transformation kit (Shanghai  Maokang Biotechnology, China) with 3% cellulose R10 (Yakult Pharmaceutical, Japan) and 0.8% macerozyme R10 (Yakult Pharmaceutical, Japan). The middle section of expanded Populus leaves (micropropagated Populus clone ‘Nanlin 895’) were cut into 0.5~1 mm fine strips, digested for 30 min in the dark using a desiccator for Vacuum infiltrate, and succeeded with digestion in the dark for 5 h without shaking. The protoplasts were harvested by filtering through a 70 μm pore nylon cloth and then suspended in 535 the transfection.

 

 

 

规格信息

品牌:

Jinpan

CAS:

N/A

规格:

40T

货期:

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