Fluo-8 AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针,超级纯
货号: JP4505-50UG 品牌: Jinpan 标签: 细胞生物学研究
描述
Fluo-8, AM, Cell Permeant钙离子荧光探针,超级纯
(最亮的可见光钙离子探针)
搜索关键词:
Fluo-8 AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针;Fluo-2, AM;Fluo-2 Medium Affinity,Acetoxymethyl Ester;Fluo-3;Fluo-4;HTS Screen Assay 高通量筛选;
订购信息:
产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格(元) |
Fluo-8, AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针,超级纯 | JP4505-50UG | 50μg | 375 |
Fluo-8, AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针,超级纯 | JP4505-250UG | 5×50μg | 1500 |
产品描述
Fluo-8,是目前最亮的可见光激发波长Ca2+荧光探针,其荧光强度比Fluo-4强两倍,比Fluo-3强四倍。Fluo-8具中等程度的Ca2+亲和力,几乎接近Fluo-3,Fluo-4(Fluo-3: Kd=0.4μM、Fluo-4: Kd=0.36μM、Fluo-4: Kd= 0.389μM),使用上几乎同Fluo-3和Fluo-4。
Fluo-8不仅维持Fluo-3,Fluo-4便捷的光谱检测特性,与Ca2+结合后的最大激发波长为490nm,最大发射波长为514nm。而且具有改善的细胞载入和Ca2+响应能力。Fluo-8加载具较弱的温度依赖性,在室温或37℃孵育皆染色良好,不像Fluo-3,Fluo-4严格要求在37℃孵育,此特征使其更适用于HTS高通量筛选实验。Fluo-8应用广泛,与许多细胞系和靶向样本兼容,不会受配体或靶标本身信号干扰。Fluo-8可通过激光共聚焦显微镜、流式细胞仪、荧光酶标仪、荧光显微镜等来检测胞内钙离子水平的变化。
Fluo-8, AM是Fluo-8的一种乙酰甲酯衍生物,具有细胞膜渗透性,只需简单培养,即可轻易进入细胞。一旦进入细胞内,即被其内酯酶剪切生成不具膜渗透性的Fluo-8,从而滞留在胞内以发挥相应生理功能。本品以50μg小包装的冻干粉形式供货,用于细胞内Ca2+水平检测时,常用浓度为1-5μM。
基本特性:
1) 同义名:Fluo-8, Acetoxymethyl Ester;Fluo-2, AM; Fluo-2 Medium Affinity, Acetoxymethyl Ester;
2) 化学名:Bis(acetoxymethyl) 2,2′-((4-(6-(acetoxymethoxy)-3-oxo-3H-xanthen-9-yl)-2-(2-(bis(2-acetoxymethoxy)-2-oxoethyl)amino)phenoxy)ethoxy)phenyl)azanediyl)diacetate
3) 分子式:C50H50N2O23
4) 分子量:1046.93
5) 最大激发/发射波长:490/514 nm(Ca2+结合)
6) 溶解性:溶于DJPO(1~5mM)
7) 化学结构式:
保存与运输方法
保存:-20℃干燥避光保存,有效期一年。
运输:室温运输。
注意事项
1)荧光染料均存在淬灭问题,请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭。
2)乙酰氧基甲基酯(AM)易吸潮,冰箱取出后请在干燥的环境放至室温后再开封。由于试剂微量,开封前请将其短暂离心,以保证粉末落入管底。
3)Fluo-8, AM在4℃、冰浴等较低温度情况下会凝固而粘在离心管管底、管壁或管盖内,可在20-25℃温育片刻至全部融解后使用。
4)Fluo-8, AM第一次使用,建议储存液现配现用,分装成单次用量,严格做到≤-20℃密封干燥冻存,以防止受潮。为了保证良好的实验效果,尽量在短时间内使用。
5)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法
【注意】以下使用方法仅用作参考,可根据具体的实验条件做出调整。
A、试剂准备
1. 配制Pluronic F-127母液:称取100mg Pluronic F-127粉末(货号:JP4301-100MG)中加入500μl DJPO,配制成20%(w/v) DJPO母液。溶解过程需要在40-50℃加热20-30min。溶液室温保存,不用冷藏。如有结晶析出,可以重新加热后溶解,不影响使用。
2. HHBS Buffer(1X Hank’s Balanced Salt Solution with 20mM HEPES buffer, pH 7.3)或者其他生理缓冲液
B,操作步骤
1. 用无水DJPO溶解Fluo-8, AM配制成1-5mM的储存液,或将已配好的Fluo-8, AM储存液取出于室温回温。(如:若配制成4mM的母液,需向50µg Fluo-8,AM中加入11.9µl无水DJPO)。
2. 用HHBS或其他生理缓冲液将Fluo-8, AM+DJPO储存液稀释到1-10µM的工作液,提前加入适量的20% Pluronic F-127溶液,使其终浓度为0.02%。
【注①】:Fluo-8, AM应用在大部分细胞的推荐加载浓度为4-5µM,具体的使用浓度需根据实验要求进行优化。为了避免过度加载造成细胞毒性,建议在取得有效结果的基础上尽量使用最低探针浓度。
【注②】:Fluo-8, AM工作液需现配现用,避免反复冻存。
【注③】:Pluronic F-127可以防止Fluo-8, AM在溶液中聚合并促使探针更好进入细胞。但Pluronic F-127可降低Fluo-8, AM的稳定性,因此只建议在配制工作液时加入,不建议加入储存液长期保存。
3.【可选】如果细胞内含有机阴离子转运体,丙磺舒(Probenecid,1-2.5mM)或磺吡酮(Sulfinpyrazone,0.1-0.25mM)可能需要加入细胞培养基内,以降低去酯化探针的泄露水平。
【注①】:丙磺舒或磺吡酮储存液相当偏碱,因此加入培养基后需要重新调整pH。
4. 将准备好的Fluo-8, AM工作液加入细胞,加入量以覆盖细胞为准。37℃或者室温孵育20-60min。
【注①】:关于孵育的时间,如果首次做实验不能确定,建议先孵育30min,看荧光效果;如果细胞死亡较多,适当缩短时间;如果荧光强度太弱,适当延长时间。
【注②】:降低探针加载温度可能会降低探针的区室化现象。
5. 吸掉染色工作液,并用HHBS或其他生理缓冲液(如有必要,使用含转运体抑制剂如2.5mM丙磺酸的缓冲液)替换,以去除多余探针。
6. 用适当的仪器如激光共聚焦、流式细胞仪、荧光酶标仪,以及波长Ex/Em=490/520 nm来进行检测。
【注①】:Fluo-8, AM进入胞内后,经酯酶降解形成Fluo-8,并不是以共价结合的形式滞留在细胞质内。因此不可对加载染料的活细胞进行固定处理,再进行Ca2+水平检测。
— — Written/Edited by V. Shallan【版权归集奇生物/JP金畔所有】
规格信息
品牌: |
Jinpan |
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CAS: |
N/A |
规格: |
50μg |
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