Trypsin 1:250, Powder (Porcine) 猪源胰蛋白酶1:250(粉末)

Trypsin 1:250, Powder (Porcine) 猪源胰蛋白酶1:250(粉末)

货号: JP2002-25G 品牌: Jinpan 标签: 细胞生物学研究

描述

Trypsin 1:250, Powder (Porcine) 猪源胰蛋白酶1:250(粉末)

产品标签

Trypsin 1:250 胰酶;Collagenase NB 4 胶原酶NB4(标准级别);Trypsin-EDTA (0.25%);Dispase II中性蛋白酶;Roche;CAS:9001-12-1;

产品信息

产品名称 产品编号 规格 价格(元)
Trypsin 1:250 (Porcine) 猪源胰蛋白酶1:250(粉末) JP2002-25G 25g 180
Trypsin 1:250 (Porcine) 猪源胰蛋白酶1:250(粉末) JP2002-100G 100g 540

产品描述

胰蛋白酶(胰酶,Trypsin),CAS:9002-07-7,来源于胰腺的一种丝氨酸蛋白酶,由223个氨基酸残基组成的单链多肽,底物特异性是带正电荷的赖氨酸和精氨酸侧链。胰酶主要切割赖氨酸和精氨酸羧基端,当两者之一紧随为脯氨酸的情况除外。另外,当切割位点任一边紧邻酸性残基,胰酶水解速率也会减缓。

胰蛋白酶(胰酶,Trypsin),以无活性的胰蛋白酶原(Trypsinogen)形式分泌于胰腺中,通过切割其末端六肽而得到活化,产生天然单链形式的β-胰酶(β-Trypsin),随后进行有限的自发裂解产生具水解活性的α-Trypsin(由二硫键共价连接的二条肽链组成)。胰酶水解活性可被多种化合物所抑制,有1)来源于胰腺、大豆、青豆、蛋清的天然胰蛋白酶抑制剂;2)银离子;3)有机磷化合物,如氟磷酸异丙酯DFP;4)特定蛋白酶抑制剂,如AEBSF、抗蛋白酶、抑肽酶、PJPF、TLCK等;

本品是来源于猪胰腺的胰蛋白酶冻干粉,经γ射线处理灭活病毒,经过猪细小病毒和支原体检测。基于标准测定方法的酶活力为250 units/mg,即1:250。广泛用于细胞传代,对贴壁细胞进行消化以制备单细胞悬液,常用的工作浓度是0.025-0.5%(w/v)。也可联合其他蛋白酶如胶原酶、弹性蛋白酶一起使用,以消化组织。

产品特性

1) EC NO:3.4.21.4

2) CAS NO:9002-07-7

3) 同义名:Trypsin, from Porcine Pancreas; Trypsin Powder, Porcine 1:250; Tryptase; Tryptar; Cocoonase; Parenzyme; Parenzymol;

4) 分子量:23.4 kDa

5) 螯合剂:无EDTA

6) 酚红指示剂:无酚红

7) 外观:白色至类白色粉末

8) 溶解性:溶于水,几乎不溶于乙醇和甘油

9) 最佳工作温度:37°C

10)最佳工作pH:7.0-9.0

11)酶活性:根据美国药典专论规定的胰蛋白酶活性测定条件(25°C 10 min,pH 7.6),1 g胰蛋白酶能消化250 g酪蛋白底物。

保存与运输方法

保存:2-8℃干燥保存,3年有效。

运输:冰袋运输。

使用方法

1. 胰酶储存液(2.5%,w/v)的配制

1.1 称取2.5g胰酶粉末溶于100ml不含钙镁的平衡盐缓冲液,如HBSS(Hank′s Balanced Salt Solution),并调整pH在7.4-7.6,此时得到的即2.5%胰酶储存液,置于4℃短时间保存,3个月相对稳定。建议分装冻存,利于长期保存。解冻后可能会出现少量沉淀,属于正常现象,不会影响使用效力。

1.2 细胞的消化可以直接用胰酶溶液,但常使用胰酶-EDTA溶液,因为EDTA是一种II价金属离子螯合剂,能够螯合钙镁离子,减少细胞间的粘附性,从而增强胰酶活性。

【注①】:胰酶用于细胞传代的工作浓度范围为0.025%-0.5%,具体浓度的选择主要受胰酶活性、孵育时间和细胞系类型几个方面影响。若用过高浓度消化过长时间,会破坏细胞膜结构,进而杀死细胞。当对使用浓度把握不大,建议先使用低浓度消化,慢慢的摸索出合适的工作浓度。

【注②】:胰酶-EDTA溶液的配制(仅作参考,根据需要的实际胰酶浓度来调整)

无Ca2+、Mg2+及酚红的平衡盐溶液 485ml
胰酶储存液(2.5%,w/v) 10 ml
EDTA溶液(2%,w/v) 5 ml
  1. 2. 贴壁细胞消化(培养板)
  2. 2.1 吸掉培养板内培养液,用不含Ca2+/Mg2+的缓冲液清洗单层贴壁细胞,直至清除残余血清,吸掉盐溶液。
  3. 2.2 向上述贴壁细胞中加入适量胰酶溶液或者胰酶-EDTA溶液,完全覆盖细胞即可。此时将细胞置于37℃培养箱孵育2min左右
  4. 2.3 立即取出,倾斜培养板,吸掉胰酶或者胰酶-EDTA溶液,轻拍培养板,观察细胞的消化状态。若消化不够,可放回37℃培养箱短时孵育,直至细胞从表面脱落。整个消化过程可通过倒置显微镜来观察。
  5. 【注①】:消化时间跟细胞类型、细胞密度、培养液内血清浓度、胰酶活性、以及消化前细胞培养时间等因素有关。胰酶对细胞的损伤以及消化时间尽量保持在最低水平】。
  6. 2.4 加入含血清的适量培养液到消化好的细胞内,轻轻反复吹吸从而将细胞从培养板底尽可能吹离,以及吹散细胞团,吹洗时尽量避免气泡的产生。
  7. 【注①】:血清能抑制进一步的胰酶消化,保护细胞不被过度消化。当使用无血清培养液,建议此时加入等摩尔的大豆胰酶抑制剂(Soybean trypsin inhibitor)以起到相同效果。
  8. 2.5 进行下一步操作【亚培养,或细胞计数】或细胞冻存。
  9. 【注①】:操作时务必小心谨慎,同时时刻注意避免交叉污染发生的可能性。

注意事项

1)胰蛋白冻干粉产品常遇到的活性定义及其转换,

1 BAEE Unit:在25℃,pH 7.6的条件下,以BAEE为底物,3.2 ml的反应体系中,A253吸光值每分钟会发生0.001的变化即为一个酶活单位。

1 TAME Unit:在25℃,pH 8.2,0.001M Ca2+条件下,每分钟水解1μmol p-toluenesulfonyl-L-arginine methyl ester(TAME)的用量。

1 USP Unit:在指定条件下,每分钟引起吸光值发生0.003的变化的样品活性。

1 TAME unit = 19.2 USP or NF units = 57.5 BAEE Unit

2)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

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产品编号 产品名称 规格 价格(元)
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— — Written/Edited by V. Shallan【版权归集奇生物/JP金畔所有】

 

规格信息

品牌:

Jinpan

CAS:

9002/7/7

规格:

25g

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