OrigamiB(DE3) Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞
货号: MF2346-5000UL 品牌: Jinpan 标签: 分子生物学, 感受态细胞
描述
OrigamiB(DE3) Chemically Competent Cell
大肠杆菌化学感受态细胞
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货号 | 产品名称 | 规格 | 价格(元) |
MF2346-1000UL | OrigamiB(DE3) Chemically Competent Cell化学感受态细胞 | 10×100μl | 396 |
MF2346-5000UL | OrigamiB(DE3) Chemically Competent Cell化学感受态细胞 | 50×100μl | 1696 |
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产品组分:
组分编号 |
组分名 |
货号(规格) | |
MF2346-1000UL | MF2346-5000UL | ||
MF2346-A | OrigamiB(DE3) Competent Cell | 10×100μl | 50×100μl |
MF2346-B | Control Vector puC19,10pg/μl | 10μl | 10μl |
菌株描述
OrigamiB菌株与原始菌Origami一样,包含突变的硫氧还蛋白还原酶(Thioredoxin Reductase, trxB)和谷胱甘肽还原酶(glutathione reductase,gor),表达主要还原途径的两个关键酶,有利于形成正确折叠的含二硫键的蛋白,增强蛋白的可溶性。该菌株包含BL21的lon和ompT缺失,能提高蛋白稳定性。
DE3命名表明该菌株染色体上整合λ噬菌体DE3溶原体(携带lacUV5启动子调控的T7 RNA聚合酶基因)。这种菌株适用于目的基因克隆在pET载体上的蛋白生产,由IPTG诱导表达。
OrigamiB(DE3)菌株具有卡那霉素和四环素抗性,因此不适合与仅能用卡那霉素或四环素筛选的质粒联用。
OrigamiB(DE3)菌株基因型:F- ompT hsdSB(rB- mB-) gal dcm lacY1 ahpC (DE3) gor522:: Tn10 trxB (KanR, TetR)
产品描述
本品是大肠杆菌OrigamiB(DE3)菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞,可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率可达108 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。
保存与运输条件:
保存:-80℃保存,6个月有效。
运输:干冰运输。
注意事项
- 感受态细胞必须用干冰运输。感受态细胞应在-80℃保存,不可反复冻融且放置时间过长,否则会减低感受态细胞的转化效率。
- 最好在冰上融化感受态细胞。
- 进行转化操作时,需在相应温度及无菌条件下进行。
- 为防止转化实验不成功,可保留部分连接反应液以重新转化,将损失降到最低。
- 产品包装内含质粒pUC19 DNA(10pg/μl),供对照实验用。
- OrigamiB(DE3)菌株具有卡那霉素和四环素抗性,不能用于具此抗性质粒的表达。
- 诱导时,IPTG浓度范围可选:0.1~2mM。
- 为了得到足量的蛋白,需就最佳诱导时间、温度、IPTG浓度进行优化。
- 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】
- 从-80℃冰箱取出取感受态细胞,迅速置于冰浴中,5min后待菌块融化,加入目的DNA,用手轻弹管底轻轻混匀,冰浴静置25min。
- 42℃水浴热激45s,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置2min。此过程不要摇动离心管。
- 向每个离心管中加700 μl无菌的LB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃摇床,200 rpm振荡培养60min,目的使质粒上相关的抗性标记基因表达,使菌体复苏。
- 低速离心收菌(比如5000rpm,1min),留取100μl左右上清,用枪轻轻吹打重悬菌块,之后加到所选质粒筛选抗生素的LB固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于室温(或37℃)直至液体被吸收,倒置培养,37℃培养过夜。【注意】:
a)涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多,可不用离心,直接取少量转化产物涂布平板;反之,若转化的DNA总量较少,则通过离心(4,000 rpm,2min)后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。
b)新制备的固体培养基不易涂干,可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
c)涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转化菌落数过少,可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。
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JP0021-10G | Chloramphenicol, USP Grade氯霉素 | 10g |
JP0019-10G | Kanamycin Sulfate硫酸卡那霉素 | 10g |
MF2002-1G | IPTG异丙基-β-D-硫代半乳糖苷 | 1g |
附录I 蛋白诱导步骤(仅作参考)
1)从新鲜涂布平板上挑取一单克隆,转移到含相应抗生素的3ml LB液体培养基内。
2)37℃,200rpm摇菌培养过液。
3)将步骤2)中过夜培养的菌液吸取0.5ml接种到含相应抗生素的50ml LB液体培养基内(建议使用500ml三角瓶培养)。
4)37℃,150rpm摇菌培养直至OD600达到0.6~0.8(建议0.6,约2.5h)。
5)【可选】用移液枪吸取1ml培养物到干净的离心管内,置于冰上直至用于凝胶分析或保存在-20℃。这是非诱导的对照样本。
5)加入IPTG使其终浓度为1mM。目的蛋白的最佳诱导时间可能在2~16h,依蛋白而异。
6)37℃,120rpm培养2~4h。为了确定目的蛋白的最佳诱导时间,建议作一个时间周期优化实验,范围从2~16h。
7)将培养物冰浴10min。4℃,5,000 x g离心10min收集菌株。
8)吸掉上清,将沉淀保存在-20℃(也能保存在更低的温度)。
IPTG母液(1M)配制
称量2.38g IPTG(Mw: 238.30)溶于适量去离子水,充分溶解后,调整终体积到10ml,并过滤除菌,即得到1M ITPG母液。
规格信息
品牌: |
Jinpan |
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CAS: |
N/A |
规格: |
50×100μl |
货期: |
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