EHA105 Electrocompetent cell 农杆菌电转感受态细胞
货号: MF2307-0500UL 品牌: Jinpan 标签: 分子生物学
描述
EHA105 Electrocompetent cell 农杆菌电转感受态细胞
产品标签:
EHA105菌株;农杆菌感受态细胞;Rifampicin(Rif) 利福平;Kanamycin(kan)卡那霉素; EHA101;LBA4404;GV3101;AGL1;植物转基因研究;
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货号 | 产品名称 | 规格 | 价格(元) |
MF2307-0500UL | EHA105 Electrocompetent cell 农杆菌电转感受态细胞 | 10×50μl | 600 |
MF2307-2500UL | EHA105 Electrocompetent cell 农杆菌电转感受态细胞 | 50×50μl | 2400 |
产品描述:
EHA105菌株由EHA101菌株改造而来,染色体背景为C58,核基因含利福平抗性基因rif,为了便于转化操作,此菌株携带一无自身转运功能的琥珀碱型Ti质粒pEHA105(pTiBo542DT-DNA),此质粒含有vir基因(vir基因是T-DNA插入植物基因组必需的元件,pEHA105(pTiBo542DT-DNA)质粒自身的T-DNA转移功能虽被破坏,但可以帮助转入的双元载体T-DNA顺利转移)。EHA105菌株适用于水稻、烟草等植物的转基因操作。
我司(金畔生物)提供的EHA105电转感受态细胞经特殊工艺制作,特别适合大质粒的转化。基因型为C58 (rifR) Ti pEHA105 (pTiBo542DT- DNA) Succinamopine,经pCAMBIA2301质粒检测转化效率>105cfu/μg DNA。
产品组分:
组分编号 | 组分名称 |
货号(规格) |
|
MF2307-0500UL | MF2307-2500UL | ||
MF2307-A | EHA105 Electrocompetent cell | 10×50μl | 50×50μl |
MF2307-B | pCAMBIA2301 Control Vector (10ng/μl) | 10μl | 10μl |
保存与运输条件:
保存:-80℃保存,1年有效。
运输:干冰运输。
注意事项
1) 感受态细胞应保存在-80℃,不可反复冻融和放置时间过长,以免降低感受态细胞的转化效率。
2) 整个转化操作,严格根据相应温度及无菌条件要求进行。
3) 加入质粒的体积不应大于感受态体积的1/10。质粒不纯或存在乙醇等有机物污染,会导致转化效率急剧下降。质粒增大一倍,转化效率下降一个数量级。
4) 为确保最高转化效率,整个操作过程应尽量轻柔,并保持低温。
5) 转化高浓度的质粒可相应减少最终涂板用量。
6) 平板上克隆密度过大时,由于营养不足,克隆生长变慢,菌落变小。为获得大菌落,应减少质粒用量。
7) 利福平浓度应≤25μg/ml,过高浓度不利于农杆菌生长,会降低其生长速度和转化效率。我司EHA101感受态计算转化效率时所用平板只含50μg/ml卡那霉素,若所用平板含20μg/ml 利福平,则转化效率降低到1/2。
8) 培养基中加入利福平的目的是防止杂菌生长、筛选农杆菌;根据所用菌株抗性加入Ti质粒筛选抗生素可防止Ti质粒丢失,但这些筛选抗生素不利于农杆菌的转基因操作,所以一般培养农杆菌时不考虑这些筛选抗生素,因Ti质粒丢失的概率极低(基本可以忽略)。
9) 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法
1) 将0.1 cm电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净吸水纸上5min,待其沥干水分,正置5min,使乙醇充分挥发干净,立即插入冰中,压实冰面,电极杯顶离冰面0.5cm以方便盖上杯盖,冰中静置5min使其充分降温。
2) 取-80℃保存的感受态细胞于室温或手心片刻待其部分融化,达到冰水混合状态时插入冰浴中使其完全融化。
3) 往50μl感受态细胞悬液中加入0.01~1μg(体积不大于6μl)质粒DNA,用手拨打管底使其混匀,立即插入冰中。用枪轻轻吹打混匀感受态细胞-质粒之后快速转移到电击杯中,盖上杯盖,空管保留待用【注意:由于感受态转化效率较高,第一次使用最好做预试验确定最佳的质粒用量】。
4) 启动电转仪,设置参数:C=25 μF,PC=200 ohm,V=2400 V(此参数参考Bio-rad,具体使用请参考电转仪推荐步骤来操作),将电击杯快速放入电转槽中,电击完成快速插入冰中。
5) 加入700 μl无抗生素的LB并转移到感受态空管中,于28℃振荡培养2~3h。
6) 6,000rpm离心1min,吸掉600ul上清,之后用枪轻轻吹打重悬菌体。之后加到含相应抗生素的LB或YEB平板上,用无菌玻棒轻轻的将细胞均匀涂开。室温正置10 min,待液体被吸收后,倒置平板,28℃培养2-3天。【注意:当平板只含转化所用双元载体抗生素时,28℃培养48h即可;当平板中加入双元载体抗生素的同时,再加入20μg/ml 利福平时,需28℃培养60h;若使用的平板含50μg/ml 利福平,需在28℃培养72-90h。】
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附表1 固体和液体LB培养基配方
组分Component | LB(液体)/升 | LB(固体)/升 |
胰蛋白胨Tryptone | 10g | 10g |
酵母提取物Yeast extract | 5g | 5g |
氯化钠NaCl | 10g | 10g |
1N NaOH | 调整pH至7.0 | 调整pH至7.0 |
琼脂Agar | / | 15g |
附表2 固体和液体YEB培养基配方
组分Component | YEB(液体)/升 | YEB(固体)/升 |
胰蛋白胨Tryptone | 5g | 5g |
酵母提取物Yeast extract | 1g | 1g |
牛肉浸膏Beef Extract | 5g | 5g |
蔗糖Sucrose | 5g | 5g |
七水硫酸镁MgSO4·7H2O | 0.49g | 0.49g |
1N NaOH | 调整pH至7.0 | 调整pH至7.0 |
琼脂Agar | / | 15g |
附表3 常见农杆菌对抗生素敏感性总表
农杆菌菌株 | 羧苄(carb) | 链霉素(strep) | 利福平(rif) | 庆大霉素(gent) | 卡那霉素(kan) |
EHA101 | S | S | R | S | R |
EHA105 | S | S | R | S | S |
LBA4404 | S | R | R | S | S |
GV3101 | S | S | R | R | S |
AGL1 | R | S | R | S | S |
【备注】:S代表敏感,R代表抗性。 |
— — Written/Edited by V. Shallan【版权归集奇生物/JP金畔所有】
规格信息
品牌: |
Jinpan |
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CAS: |
N/A |
规格: |
10×50μl |
货期: |
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