EHA105 Electrocompetent cell 农杆菌电转感受态细胞

EHA105 Electrocompetent cell 农杆菌电转感受态细胞

货号: MF2307-0500UL 品牌: Jinpan 标签: 分子生物学

描述

EHA105 Electrocompetent cell 农杆菌电转感受态细胞

EHA105 Electrocompetent cell 农杆菌电转感受态细胞

 

产品标签:

EHA105菌株;农杆菌感受态细胞;Rifampicin(Rif) 利福平;Kanamycin(kan)卡那霉素; EHA101;LBA4404;GV3101;AGL1;植物转基因研究;

 

产品订购:更大包装或产品技术问题,请来电/在线咨询,电话:021-50837765 。

货号 产品名称 规格              价格(元)  
MF2307-0500UL    EHA105 Electrocompetent cell 农杆菌电转感受态细胞    10×50μl 600
MF2307-2500UL EHA105 Electrocompetent cell 农杆菌电转感受态细胞 50×50μl 2400

 

产品描述:

EHA105菌株由EHA101菌株改造而来,染色体背景为C58,核基因含利福平抗性基因rif,为了便于转化操作,此菌株携带一无自身转运功能的琥珀碱型Ti质粒pEHA105(pTiBo542DT-DNA),此质粒含有vir基因(vir基因是T-DNA插入植物基因组必需的元件,pEHA105(pTiBo542DT-DNA)质粒自身的T-DNA转移功能虽被破坏,但可以帮助转入的双元载体T-DNA顺利转移)。EHA105菌株适用于水稻、烟草等植物的转基因操作。

我司(金畔生物)提供的EHA105电转感受态细胞经特殊工艺制作,特别适合大质粒的转化。基因型为C58 (rifR) Ti pEHA105 (pTiBo542DT- DNA) Succinamopine,经pCAMBIA2301质粒检测转化效率>105cfu/μg DNA。

 

产品组分:

组分编号     组分名称

货号(规格)

MF2307-0500UL      MF2307-2500UL    
MF2307-A EHA105 Electrocompetent cell 10×50μl 50×50μl
MF2307-B pCAMBIA2301 Control Vector (10ng/μl)       10μl 10μl

 

保存与运输条件:

保存:-80℃保存,1年有效。

运输:干冰运输。

 

注意事项

1)   感受态细胞应保存在-80℃,不可反复冻融和放置时间过长,以免降低感受态细胞的转化效率。

2)   整个转化操作,严格根据相应温度及无菌条件要求进行。

3)   加入质粒的体积不应大于感受态体积的1/10。质粒不纯或存在乙醇等有机物污染,会导致转化效率急剧下降。质粒增大一倍,转化效率下降一个数量级。

4)   为确保最高转化效率,整个操作过程应尽量轻柔,并保持低温。

5)   转化高浓度的质粒可相应减少最终涂板用量。

6)   平板上克隆密度过大时,由于营养不足,克隆生长变慢,菌落变小。为获得大菌落,应减少质粒用量。

7)   利福平浓度应≤25μg/ml,过高浓度不利于农杆菌生长,会降低其生长速度和转化效率。我司EHA101感受态计算转化效率时所用平板只含50μg/ml卡那霉素,若所用平板含20μg/ml 利福平,则转化效率降低到1/2。

8)   培养基中加入利福平的目的是防止杂菌生长、筛选农杆菌;根据所用菌株抗性加入Ti质粒筛选抗生素可防止Ti质粒丢失,但这些筛选抗生素不利于农杆菌的转基因操作,所以一般培养农杆菌时不考虑这些筛选抗生素,因Ti质粒丢失的概率极低(基本可以忽略)。

9)   为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

1)    将0.1 cm电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净吸水纸上5min,待其沥干水分,正置5min,使乙醇充分挥发干净,立即插入冰中,压实冰面,电极杯顶离冰面0.5cm以方便盖上杯盖,冰中静置5min使其充分降温。

2)   取-80℃保存的感受态细胞于室温或手心片刻待其部分融化,达到冰水混合状态时插入冰浴中使其完全融化。

3)    往50μl感受态细胞悬液中加入0.01~1μg(体积不大于6μl)质粒DNA,用手拨打管底使其混匀,立即插入冰中。用枪轻轻吹打混匀感受态细胞-质粒之后快速转移到电击杯中,盖上杯盖,空管保留待用【注意:由于感受态转化效率较高,第一次使用最好做预试验确定最佳的质粒用量】。

4)    启动电转仪,设置参数:C=25 μF,PC=200 ohm,V=2400 V(此参数参考Bio-rad,具体使用请参考电转仪推荐步骤来操作),将电击杯快速放入电转槽中,电击完成快速插入冰中。

5)    加入700 μl无抗生素的LB并转移到感受态空管中,于28℃振荡培养2~3h。

6)   6,000rpm离心1min,吸掉600ul上清,之后用枪轻轻吹打重悬菌体。之后加到含相应抗生素的LB或YEB平板上,用无菌玻棒轻轻的将细胞均匀涂开。室温正置10 min,待液体被吸收后,倒置平板,28℃培养2-3天。【注意:当平板只含转化所用双元载体抗生素时,28℃培养48h即可;当平板中加入双元载体抗生素的同时,再加入20μg/ml 利福平时,需28℃培养60h;若使用的平板含50μg/ml 利福平,需在28℃培养72-90h。】

相关产品【感受态细胞系列】

产品编号 产品名称 规格
MF2306-0500UL       EHA101 Electrocompetent cell 农杆菌电转感受态细胞 10×50μl      
MF2307-0500UL EHA105 Electrocompetent cell 农杆菌电转感受态细胞 10×50μl
MF2308-0500UL LBA4404 Electrocompetent cell 农杆菌电转感受态细胞 10×50μl
MF2309-0500UL GV3101 Electrocompetent cell 农杆菌电转感受态细胞 10×50μl
MF2310-0500UL AGL1 Electrocompetent cell 农杆菌电转感受态细胞 10×50μl
MF2301-1000UL EHA101 Chemically Competent Cell 农杆菌化学感受态细胞            10×100μl          
MF2302-1000UL EHA105 Chemically Competent Cell 农杆菌化学感受态细胞 10×100μl
MF2303-1000UL LBA4404 Chemically Competent Cell 农杆菌化学感受态细胞 10×100μl
MF2305-1000UL AGL1 Chemically Competent Cell 农杆菌化学感受态细胞 10×100μl
MF2304-1000UL GV3101 Chemically Competent Cell 农杆菌化学感受态细胞      10×100μl

相关产品【抗生素系列】

产品编号 产品名称 规格        
JP0014-1G        Rifampicin, USP Grade 利福平 1g
JP0014-5G Rifampicin, USP Grade 利福平 5g
JP0016-5G Spectinomycin Dihydrochloride Pentahydrate 壮观霉素二盐酸盐五水合物 5g
JP0016-25G Spectinomycin Dihydrochloride Pentahydrate 壮观霉素二盐酸盐五水合物      25g
JP0017-5G Carbenicillin, Disodium Salt 羧苄青霉素二钠盐 5g
JP0017-25G Carbenicillin, Disodium Salt 羧苄青霉素二钠盐 25g
JP0019-10G Kanamycin Sulfate 硫酸卡那霉素 10g
JP0019-25G Kanamycin Sulfate 硫酸卡那霉素 25g
JP0025-1G Gentamycin Sulfate Salt 硫酸庆大霉素 1g
JP0023-25G Streptomycin Sulfate, USP Grade 硫酸链霉素 25g

 

附表1 固体和液体LB培养基配方

组分Component                   LB(液体)/升           LB(固体)/升             
胰蛋白胨Tryptone 10g 10g
酵母提取物Yeast extract 5g 5g
氯化钠NaCl 10g 10g
1N NaOH 调整pH至7.0 调整pH至7.0
琼脂Agar / 15g

附表2 固体和液体YEB培养基配方

组分Component                   YEB(液体)/升         YEB(固体)/升           
胰蛋白胨Tryptone 5g 5g
酵母提取物Yeast extract 1g 1g
牛肉浸膏Beef Extract 5g 5g
蔗糖Sucrose 5g 5g
七水硫酸镁MgSO4·7H2O 0.49g 0.49g
1N NaOH 调整pH至7.0 调整pH至7.0
琼脂Agar / 15g

附表3 常见农杆菌对抗生素敏感性总表

农杆菌菌株  羧苄(carb)   链霉素(strep)  利福平(rif)    庆大霉素(gent) 卡那霉素(kan)
EHA101 S S R S R
EHA105 S S R S S
LBA4404 S R R S S
GV3101 S S R R S
AGL1 R S R S S
【备注】:S代表敏感,R代表抗性。

 

 

 — — Written/Edited by V. Shallan【版权归集奇生物/JP金畔所有】

规格信息

品牌:

Jinpan

CAS:

N/A

规格:

10×50μl

货期:

咨询客服