在蛋白表达中质粒的不稳定性是一个不得不面对而又亟需解决的问题。一般情况下,蛋白表达过程需要携带目的基因的载体的菌体质粒过表达。由于蛋白表达产物(即过表达的目的蛋白)对于菌体的代谢来说是一个沉重的负担,因此携带表达载体质粒的菌体数量会逐渐减少。抗生素抗性基因是为避免不携带质粒的菌体存活并在菌群中占主导地位而使用的最常见的选择性标记。然而,从医疗及环保的角度,蛋白表达产物中的抗生素污染(包括编码抗生素抗性基因的DNA)是不可接受的。
Delphi Genetics提供的创新型产品和服务都使用了基于细菌制毒-解毒基因这一独特的Staby™技术,极大的提高了DNA克隆的稳定性和高效率,促进不含抗生素的重组蛋白的成功生产。其相应的产品是由一系列新颖独特的细菌菌株以及相应的克隆和表达载体体现出来,并以Kit的形式提供给客户使用。其产品领域可分为用于PCR克隆的StabyCloning™,用于原核表达的StabyExpress™、Staby™Codon、Cherry™ Express等表达系统,以及相应的感受态细胞核培养基等产品。
其中StabyExpress™ T7蛋白表达系统 (Genetics StabyExpress™ T7 Kit) 是基于在质粒、染色体以及噬菌体中发现的天然解毒/毒性基因的基础上研制的。ccdB毒性基因编码一组稳定的短链蛋白(约100个氨基酸),而ccdA解毒基因则编码一组不稳定的短链蛋白(约90个氨基酸),此蛋白可以中和ccdB蛋白的毒性。在StabyExpress™ T7蛋白表达系统中,ccdB毒性基因则被引入到菌体的染色体中,而解毒基因ccdA则引入到了质粒DNA中。这样当质粒存在于细菌中,就不产生毒性了。而当质粒丢失后,解毒基因降解,即产生毒性,导致细胞死亡。
在E.coli中检测此系统,结果显示完美的质粒稳定性,而一些无此技术的载体则不稳定。StabyExpress™ T7技术应用于T7启动子启动的蛋白表达。图标比较了在使用和不使用此系统的条件下69kDa蛋白表达的情况。由结果可见,使用StabyExpress质粒在诱导表达前后都能保持完美的稳定性。反之,若采用传统的BL21(DE3菌系)则质粒不能够保持稳定性。结果目的蛋白的表达量高于不采用该系统的的3-5倍,并且解毒蛋白没有表达。
StabyExpress™ T7蛋白表达系统含有表达质粒DNA、感受态细菌(克隆及表达)、菌体生长的培养液、测序引物、蛋白表达对照以及产品说明书:
产品名称 | 货号 |
StabyExpress T7 expression kit(electrocompetent 5RXN) | GE-SET7-0505 |
StabyExpress T7 expression kit(chemically-competent 5RXN) | GE-SET7-0707 |
StabyExpress T7 expression kit(electrocompetent 10RXN) | GE-SET7-1010 |
10×50ul cloning and 10×50ul expression bacteria(electrocompetent) | GE-SET7-1111 |
StabyExpress T7 expression kit(chemically-competent 10RXN) | GE-SET7-1212 |
10×50ul cloning and 10×50ul expression bacteria(chemicallycompetent) | GE-SET7-1313 |
StabyExpress T7 expression kit(electrocompetent 20RXN) | GE-SET7-2020 |
StabyExpress T7 expression kit(chemically-competent 20RXN) | GE-SET7-2222 |
20×50ul StabyExpress T7 expression bacteria SE1(electrocompetent) | GE-SET7-0020 |
20×100ul StabyExpress T7 expression bacteria SE1(chemicallycompetent) | GE-SET7-0022 |
更详细信息请点击查看:https://www.delphigenetics.com/product-details-48.html |
StabyExpress™ T7蛋白表达系统(StabyExpress™ T7 Kit)高效蛋白表达系统的特点:
- 高产量的表达蛋白产物;
- 非目的蛋白的背景降低;
- 无需每次表达之前改造质粒;
- 蛋白生产流程的标准化;
- 无需使用抗生素;
- 该系统适合于任何常规培养基
使用StabyExpress™ T7蛋白表达系统,可以在无抗生素的情况下有完美的质粒稳定性和高效的蛋白产量。StabyExpress™ 质粒在诱导表达前后都能保持完美的稳定性,蛋白表达量也是传统系统的3-5倍。
上海金畔生物科技有限公司公司作为Delphi包括澳门、香港在内的中国地区独家一级代理商。将其优秀的表达系统推荐给国内的科研以及生物制药生产用户。如果您对Delphi Genetics的Staby® 技术以及其独特的StabyCloning™、StabyExpress™、Staby™Codon、Cherry™ Express等系统感兴趣,请致电021-50837765到上海金畔生物科技有限公司垂询这一新颖的Staby® 基因克隆及蛋白表达实验解决方案,或索取最新的Delphi Genetics产品资料。