使用细胞融合试剂 GenomONE™-CF 制备抗体的方法


使用细胞融合试剂 GenomONE™-CF 制备抗体的方法

使用细胞融合试剂 GenomONE™-CF 制备抗体的方法

GenomONE ™ – CF 对细胞温和,比起PEG法,操作更简单。

本文介绍使用仅经抗原(小分子化合物)免疫1次的小鼠脾细胞在短时间内获得可产生抗体杂交瘤的实验示例。

抗原⇒CML(Nε-(carboxymethyl) lysine)和BSA(bovine serum albumin)的复合物。

 

将0.1 mg抗原(CML-BSA复合物)与弗氏完全佐剂同时皮内注射至小鼠尾根部位,2周后(没有最终免疫),切除小鼠脾脏。

 

使用GenomONE ™ – CF 对解离得到的脾脏细胞(6×107)和小鼠骨髓瘤(X-63-Ag8.653,1.2×107)进行融合。

 

融合后,用30 mL培养基(10%FBS/RPM1640)悬浮,取其中的15 mL加入市售的补充剂(HLCM:CSTi # 0232,final 0.5-2%),在3个96孔板上进行培养。第二天将一半培养基换成HAT培养基。之后每次更换培养基同样都加入HLCM。10天后,(ELISA)评估细胞集落的增殖和上清中的抗体效价。

杂交瘤阳性孔数(阳性率%)

CML抗体产生阳性孔数(阳性率%)

285/288(99%)

9/288(3.1%)

克隆1次后,从具有各种特异性模式的杂交瘤中建立CML特异性抗体产生菌株43-2C(与CEL结合性的比较)

使用细胞融合试剂 GenomONE™-CF 制备抗体的方法

43-2C抗体(IgG1, κ)的特异性

使用细胞融合试剂 GenomONE™-CF 制备抗体的方法

CML:Nε-(carboxymethyl) lysine

美拉德反应产物 (AGE) 的主要结构之一。4次免疫后使用PEG进行融合的常规方法难以获得抗体。

CEL:Nε-(carboxyethyl) lysine

与CML类似的AGE的主要结构。

MSA:mouse serum albumin

使用细胞融合试剂 GenomONE™-CF 制备抗体的方法

上述结果为其中一例,可以根据抗原、骨髓瘤、supplement等的类型来优化实验条件。

GenomONE ™ – CF 产品规格

产品编号

Freeze-dried HVJ-E
(相当于0.26 mL/支)

HVJ-E Suspending Buffer

(0.5 mL/支)

Cell Fusion Buffer
(20×浓缩)(10 mL/支)

388-18721

1

1

1

384-18723

4

3

4

※ 本页面产品仅供研究用,研究以外不可使用。