新型人iPS/ES细胞标记抗体

iPSelector<Anti-LNFP Ⅰ, Human, Mouse-Mono(R-17F)>

iPSelector是一款使用人iPS细胞作为免疫原制备的，可识别lacto-N-fucopentaoseⅠ（LNFPⅠ）的抗体。LNFPⅠ是存在于未分化的人ES细胞、人iPS细胞表面的糖链，由于细胞分化后不再表达LNFPⅠ，因此iPSelector可作为未分化iPS/ES细胞的标记物使用。

另外，由于该产品与未分化人iPS/ES细胞结合会发挥细胞伤害作用，因此亦可用于去除未分化iPS/ES细胞。

 

※ 本产品仅供研究使用。研究以外不可使用。

※ 本产品基于立命馆大学 综合科学技术研究机构与药学部及（独）医药基础、健康、营养研究所的共同研究成果

※ 商品化而成。

◆关于人iPS/ES细胞标记抗体

迄今为止，iPS/ES细胞标记抗体（TRA-1-60、TRA-1-81、SSEA-3、SSEA-4抗体等）被广泛用于确认人iPS/ES细胞的未分化状态。然而，这些抗体大部分都是使用胚胎癌细胞（embryonal carcinoma细胞：EC细胞）作为免疫原开发的抗体，与EC细胞交叉性很强。而且，如TRA（tumor rejecton antigen）的名字所示，TRA抗体能够与多种癌细胞反应。综上所述，TRA-1-60、TRA-1-81、SSEA-3、SSEA-4抗体等并不能称为iPS/ES的特异性抗体。

iPSelector <Anti-LNFP I, Human, Mouse-Mono(R-17F)>来源于人iPS细胞作为免疫原制备的杂交瘤细胞，从中筛选出满足人iPS细胞阳性、人EC细胞阴性条件的单克隆抗体。由于本产品几乎不与EC细胞交叉反应，能够高选择性、特异性地识别未分化人iPS/ES细胞，因此可以用作新型人iPS/ES细胞标记抗体。

 

◆特点

●　特异性识别未分化人iPS/ES细胞的小鼠单克隆抗体（亚型：IgG1，克隆号：R-17F）

●　可用作识别人iPS/ES细胞的标记抗体。

●　即使是人iPS/ES细胞集落的内部，也能够均匀地染色所有人iPS / ES细胞的细胞膜。

●　与未分化人iPS/ES细胞结合时会发挥细胞伤害作用，可用于去除未分化iPS/ES细胞。

 

■　比较iPSelector与现有标记抗体的细胞结合性

不同于目前常用的人多能干细胞标记抗体TRA-1-60，TRA-1-81等，iPSelector虽然与iPS细胞（Tic）以及ES细胞（KhES-3，H9）结合良好，但基本不与EC（2102Ep，NCR-G3）细胞结合。

细胞	本产品	TRA-1-60	TRA-1-81	SSEA-3	SSEA-4	SSEA-1*	Nanog
表位	糖脂质	硫酸角质素	硫酸角质素	球蛋白	球蛋白	LeX	转录因子
Tic (iPS)	++++	++++	++++	++++	++++	+	+++
KhES-3 (ES)	+++	++++	++++	+++	++++	+	+++
H9 (ES)	++++	++++	++++	+++	++++	+/-	+++
2102Ep (EC)	+/-	++++	++++	+++	+++	+	+++
NCR-G3 (EC)	++	++++	++++	+++	++++	++	++++

*SSEA-1小鼠ES/iPS标记抗体

 

◆应用实例

■　蛋白印迹

进行5 μg细胞裂解液的蛋白印迹。 左：人iPS细胞（LNFPⅠ表达） 右：HEK293细胞（LNFPⅠ不表达） 稀释度：2,000倍（0.5 μg/mL） 二抗：Anti-Mouse IgG, Goat-Poly, HRP（KPL公司 #5220-0337） 化学发光底物：Trident plus Western HRP Substrate（GNT公司 #GTX400006） 检测：使用LuminoGraph I (ATTO)在1 min内检测   由于LNFPⅠ为糖链，可在蛋白印迹中观察到多条条带。这些条带都为未分化人iPS特异性条带，而在HEK293细胞中未检测出。

■　免疫细胞染色

使用iPSelector和现存的标记抗体，染色人iPS细胞集落。在SSEA-3抗体和SSEA-4抗体中，无法染色所有人iPS细胞，但iPSelector可以均匀染色细胞集落中包含的所有人iPS细胞的细胞膜。

■　流式细胞仪

将iPSelector用于流式细胞仪。

由图可知，阴性对照无法识别未分化人iPS细胞（仅二抗/下图紫色部分），但iPSelector可以识别（下图橙色部分）。

■　Functional Assay（对人iPS细胞的浓度依赖性细胞毒性）

iPSelector显示出较强的人iPS/ES细胞特异性细胞毒性（补体非依赖性）（左图）。通过二抗处理大幅增加了细胞毒性（右图）。

已经确认了不仅对单细胞悬液中的细胞的毒性，而且对形成细胞集落的细胞也有毒性。细胞死亡的机制是通过坏死而非凋亡。

左图：iPSelector与人iPS细胞株（Tic细胞）在4°C下孵育45 min后的活细胞数。iPSelector与同型的α-MBP抗体

左图：（对照）不同，拥有抗体浓度依赖性的细胞伤害作用。

右图：iPSelector浓度为1 μg/100 μL时添加二抗能进一步增强细胞毒性。添加0.1μg/100μL二抗时，90%以上的细

左图：胞被杀死。

■　iPSelector的人ES/iPS细胞伤害活性

除了Tic细胞株（人iPS细胞）以外，iPSelector对世界上常用的人iPS细胞株201B7和人ES细胞株H9以及KhES-3也显示相同的细胞伤害活性。将细胞和抗体在4℃下孵育45 min，活细胞数量随iPSelector浓度的增加而减少。

◆抗体信息

●　免疫原：人iPS细胞（Tic）

●　小鼠单克隆抗体（克隆号：R-17F）

●　亚型：IgG1

●　验证交叉性：人

●　表位：存在于人iPS/ES细胞膜表面的糖脂质的糖链部分lacto-N-fucopentaoseⅠ 

●　(LNFPⅠ: Fuc 1-2Gal 1-3GlcNAc 1-3Gal 1-4Glc)

●　应用：免疫细胞染色、蛋白印迹、流式细胞术、去除未分化人iPS/ES细胞

●　产品规格：Protein A纯化（（1mg/mL，添加50％甘油，未添加防腐剂）

 

◆参考文献

1. Kawabe, K., et al., Glycobiology, 23, 322, (2013).

2. Matsumoto, S., et al., J. Biol. Chem., 290, 20071, (2015).

3. Nakao, H., et al., Glycoconj. J., DOI 10.1007/s10719-0169-9710-2