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重组蛋白纯化检测用
TARGET标签系统
◆特点
● 通过树脂再生,降低运作成本
● 温和洗脱、清洗,实现高纯度
● 在动物细胞表达系(HEK293T细胞、CHO细胞等)中有效纯化蛋白
TARGER标签系统使用的是可识别肽标签(21个氨基酸残基)的单抗(P20.1),是日本开发的亲和纯化标签系统。
TARGET标签系统实践证明,即使在传统系统都难以进行高纯度蛋白纯化的动物细胞表达系中,也可有效地进行亲和纯化。
◆TARGET标签系统
A rapid screening method for cell lines producing singly-tagged recombinant proteins using the“ TARGET tag”system. Tabata S. et al., J. Proteomics, 2010 Aug 5;73(9):1777-85.
◆TARGET 标签表达载体示意图
产品选择
载体 |
表达模式 |
宿主细胞 |
MCS启动子 |
pEBMulti |
非整合型稳定表达 |
灵长类(人、猴)、狗细胞等贴壁细胞 |
CAG |
pCAG |
瞬时表达 |
灵长类(人、猴)、狗细胞等贴壁细胞、大/小鼠等动物细胞 |
CAG |
和光还推出除上述抗性基因载体外的其他载体。(请点击查看)
测序用引物序列、其他载体序列的相关详细信息,已附在产品随货说明书中。
另外可点击和光主页/TARGET标签,查看序列信息、多克隆位点(MCS)信息。
TARGET标签融合蛋白的免疫沉淀 |
通过Transient 载体, 表达TARGET标签融合重组蛋白 |
培养上清(培养第7天) 每10 mL中,分别添加0.1 mL(net 0.05 mL)的抗体磁珠(①抗TARGET标签抗体琼脂糖珠、②抗DYKDDDDK标签抗体琼脂糖珠,其他公司产品),4℃条件下,进行2小时免疫沉淀。 清洗后,在回收的各珠中分别添加0.5 mL 0.2 mg/mL TARGET标签肽/TBS和0.2 mg/mL DYKDDDDK肽/TBS,4℃条件下,平稳震动0.5小时。离心后回收上清。 再分别在各珠中添加0.5 mL 0.1 M Glycine-HCl (pH 2.7),室温下,平稳震动5分钟。离心后,回收上清并用1M Tris-HCl (pH 9.0)中和。 上图为SDS-PAGE处理后的银染结果。 与传统DYKDDDDK tag相比,背景更低 →高纯度! |
M:M.W. Marker 1.仅转染载体的培养上清 2.转染了蛋白Y-TARGET 标签表达质粒的细胞培养上清 3.转染了TARGET标签-蛋白Y 表达质粒的细胞培养上清 也可使用市售的Transient载体 |
确认非整合型载体TARGET tag C端融合重组蛋白的表达 |
|
利用可编码表达人源生理活性蛋白基因的质粒转染HEK293N细胞后,从初期细胞数3×10^5cells/mL开始培养,回收0/3/7日的培养上清。 用20μL/lane的培养上清进行SDS-PAGE处理,通过银染和Western blotting,检测出蛋白的表达。 |
|
可确认到与市面售卖的Tag系统有相同的表达量和检测灵敏度。 |
◆TARGET 标签系列
产品名称 |
子类 |
适用 实验 |
规格 |
产品编号 |
包装 |
|
单抗 |
||||||
抗TARGET标签, 单抗 Anti TARGET tag, Monoclonal Antibody |
小鼠IgG1 |
IP, WB |
免疫化学用 |
016-25481 |
200 μg |
|
012-25483 |
1 mg |
|||||
HRP标签单抗 |
||||||
抗TARGET tag, 单抗, 过氧化酶结合 Anti TARGET tag, Monoclonal Antibody (P20.1) Peroxidase conjugated |
小鼠IgG1 P20.1 |
WB |
免疫化学用 |
015-25571 |
200 μL |
|
011-25573 |
1 mL |
产品名称 |
子类克隆号 |
规格 |
产品编号 |
包装 |
|||||
抗体结合琼脂糖珠 |
|||||||||
抗TARGET标签抗体琼脂糖珠 Anti TARGET tag Antibody Beads |
小鼠IgG1 P20.1 |
免疫化学用 |
018-25561 |
2 mL (Net 1 mL) |
|||||
014-25563 |
10 mL (Net 5 mL) |
||||||||
012-25564 |
50 mL (Net 25 mL) |
||||||||
识别N端、C端的TARGET标签 使用载体:4%琼脂糖 |
产品名称 |
备注 |
规格 |
产品编号 |
包装 |
肽 |
||||
TARGET标签肽 TARGET tag Peptide |
含量(HPLC)95%以上 |
基因研究用 |
200-19673 |
5 mg |
208-19674 |
25 mg |
|||
清洗液 |
||||
TARGET标签清洗液 TARGET tag Washing Solution |
已过滤消毒 |
基因研究用 |
208-19831 |
50 mL |
产品名称 |
可选Marker |
产品编号 |
包装 |
||
大肠杆菌 |
动物细胞 |
||||
瞬时表达载体 |
|||||
C端插入TARGET标签的pCAG-Ble载体 pCAG-Ble TARGET tag-C |
博莱霉素 |
165-26381 |
20 μg |
||
N端插入TARGET标签的pCAG-Ble载体 pCAG-Ble TARGET tag-N |
博莱霉素 |
162-26391 |
20 μg |
||
C端插入TARGET标签的pCAG-Bsd载体 pCAG-Bsd TARGET tag-C |
杀稻瘟素S |
165-26401 |
20 μg |
||
N端插入TARGET标签的pCAG-Bsd载体 pCAG-Bsd TARGET tag-N |
杀稻瘟素S |
162-26411 |
20 μg |
||
C端插入TARGET标签的pCAG-Hyg载体 pCAG-Hyg TARGET tag-C |
潮霉素B |
169-26421 |
20 μg |
||
N端插入TARGET标签的pCAG-Hyg载体 pCAG-Hyg TARGET tag-N |
潮霉素B |
166-26431 |
20 μg |
||
C端插入TARGET标签的pCAG-Neo载体 pCAG-Neo TARGET tag-C |
卡那霉素 |
G418 |
163-26441 |
20 μg |
|
N端插入TARGET标签的pCAG-Neo载体 pCAG-Neo TARGET tag-N |
卡那霉素 |
G418 |
160-26451 |
20 μg |
|
游离载体 |
|||||
C段插入TARGET标签的pEBMulti-Ble载体 pEBMulti-Ble TARGET tag-C |
博来霉素 |
167-26461 |
20 μg |
||
N段插入TARGET标签的pEBMulti-Ble载体 pEBMulti-Ble TARGET tag-N |
博来霉素 |
164-26471 |
20 μg |
||
C段插入TARGET标签的pEBMulti-Bsd载体 pEBMulti-Bsd TARGET tag-C |
杀稻瘟素S |
161-26481 |
20 μg |
||
N段插入TARGET标签的pEBMultI-Bsd载体 pEBMulti-Bsd TARGET tag-N |
杀稻瘟素S |
168-26491 |
20 μg |
||
C段插入TARGET标签的pEBMulti-Hyg载体
pEBMulti-Hyg TARGET tag-C |
潮霉素B |
161-26501 |
20 μg |
||
N段插入TARGET标签的pEBMulti-Hyg载体 pEBMulti-Hyg TARGET tag-N |
潮霉素B |
168-26511 |
20 μg |
||
C段插入TARGET标签的pEBMulti-Neo载体 pEBMulti-Neo TARGET tag-C |
卡那霉素 |
G418 |
165-26521 |
20 μg |
|
N段插入TARGET标签的pEBMulti-Neo载体 pEBMulti-Neo TARGET tag-N |
卡那霉素 |
G418 |
162-26531 |
20 μg |
|
C段插入TARGET标签的pEBMulti-Puro载体 pEBMulti-Puro TARGET tag-C |
氨苄青霉素 |
嘌呤霉素 |
169-26541 |
20 μg |
|
N段插入TARGET标签的pEBMulti-Puro载体 pEBMulti-Puro TARGET tag-N |
氨苄青霉素 |
嘌呤霉素 |
166-26551 |
20 μg |
◆相关产品
内参照
下表为Western Blot实验中参照用单抗一览表。
产品名称 |
规格 |
产品编号 |
包装 |
抗β肌动蛋白单抗 |
免疫化学用 |
013-24553 |
200 μg |
011-24554 |
1 mg |
||
017-24556 |
5 mg |
||
抗β肌动蛋白单抗,过氧化物酶标记 Anti β-Actin, Monoclonal Antibody, Peroxidase Conjugated |
免疫化学用 |
017-24573 |
200 μL |
抗α-微管蛋白, 单抗 Anti α-Tubulin, Monoclonal Antibody |
免疫化学用 |
011-25034 |
10 μg |
017-25031 |
200 μg |
||
013-25033 |
1 mg |
||
Anti β-Tubulin, Monoclonal Antibody |
免疫化学用 |
018-25044 |
10 μg |
014-25041 |
200 μg |
||
010-25043 |
1 mg |
||
Anti GAPDH, Monoclonal Antibody |
免疫化学用 |
016-25523 |
200 μg |
014-25524 |
1 mg |
||
010-25526 |
5 mg |
||
Anti GAPDH, Monoclonal Antibody, Peroxidase Conjugated |
免疫化学用 |
015-25473 |
200 μL |
蛋白酶抑制剂系列
产品名称 |
规格 |
产品编号 |
包装 |
蛋白酶抑制剂混合物试剂盒 I,无动物源成分(通用型) Protease Inhibitor Cocktail Set I, Animal-derived-free (for general use) (×100), Lyophilized |
通用型 |
165-26021 |
1 mL用 |
161-26023 |
1 mL用×5 |
||
蛋白酶抑制剂混合物试剂盒III, DMSO溶液(不含EDTA)(×100) |
动物细胞 |
163-26061 |
1 mL |
169-26063 |
1 mL×5 |
||
蛋白酶抑制剂混合物试剂盒V (无EDTA)(×100) |
2D电泳 |
162-26031 |
1 mL |
168-26033 |
1 mL×5 |
||
蛋白酶抑制剂混合物试剂盒 VI,DMSO溶液,用于植物(×100) |
植物细胞 |
164-26091 |
1 mL |
160-26093 |
1 mL×5 |
||
蛋白酶抑制剂混合物试剂盒VII,DMSO溶液,组氨酸标签蛋白(×100) |
His Tag 纯化※ |
167-26101 |
1 mL |
163-26103 |
1 mL×5 |
亲和标签比较表
亲和标签 |
TARGET |
PA |
6xHis |
氨基酸序列 |
(YPGQ)5V |
GVAMPGAEDDVV |
HHHHHH |
残基数 |
21 |
12 |
6 |
分子量 (kDa) |
2.34 |
1.16 |
0.84 |
等电点(pI) |
5.52 |
3.49 |
7.21 |
配体 |
TARGET tag |
PA tag |
Ni, Co, Zn, Cu |
亲和珠回收 |
40% Propyleneglycol, |
3M MgCl2, MES(pH6.0) |
0.5M Imididazole(pH7.4) |
单抗边界强度 (KD(M)) |
1.0×10-8 |
4.9×10-10 |
Ni-NTA: |
单抗 Clone No. |
P20.1(Mouse) |
NZ-1(Rat) |
Merck:HIS. H8(Mouse) |
亲和力 |
++++ |
+++++ |
+++ |
提纯成本 |
+ |
+ |
+ |
多肽洗脱 |
+++ |
+++ |
Imidazole |
背景 (培养上清) |
+ |
+ |
+++++ |
背景 (细胞裂解物) |
+ |
+ |
++++ |
亲和标签 |
DYKDDDDK |
c-Myc |
HA |
GST |
氨基酸序列 |
DYKDDDDK |
EQKLISEEDL |
YPYDVPDYA |
– |
残基数 |
8 |
10 |
9 |
218 |
分子量 (kDa) |
1.01 |
1.20 |
1.10 |
26 |
等电点(pI) |
3.97 |
4.00 |
3.56 |
– |
配体 |
DYKDDDDK tag |
c-Myc tag |
HA tag |
GST |
亲和珠回收 |
Tris-HCl, |
Tris-HCl, |
Tris-HCl, |
Glutathione, |
单抗边界强度 (KD(M)) |
2.8×10-8 |
2.2×10-9 |
2.8×10-9 |
Glutathione: |
单抗 Clone No. |
M2(Mouse) |
9E10(Mouse) |
3F10(Mouse) |
Wako:5A7(Mouse) |
亲和力 |
++++ |
++++ |
++++ |
++++ |
提纯成本 |
++ |
++ |
++ |
+ |
多肽洗脱 |
+++ |
++ |
++ |
Glutathione |
背景 (培养上清) |
++++ |
+++ |
+++ |
++++ |
背景 (细胞裂解物) |
++++ |
++++ |
+++ |
++++ |
本比较表为Wako独家调查的数据。样品、检测方法和手法的不同,特异性也会有所变化,因此无法保证各个亲和标签的功能。
产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 |