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核酸清除剂
DNA Cleaner
◆原理
本品不需要使用有机溶剂或离心管,35分钟内即可高效清除 50bp 以下 DNA 片断。另外,本品还可用于 dsRNA 的纯化。适合用于 PCR 后的引物、引物对、dNTP、DNA 聚合酶的清除和限制性内切酶处理后的酶消除。同时,利用乙醇沉淀法将 ABI 公司 BigDye Cycle Sequencing kit 扩增序列的DNA 样品纯化时,使用本品能得到清晰的序列结果。
◆特点
● 不需要使用分离管柱,也可纯化 PCR 扩增产物
● 高效浓缩 500~2,500 ng 的 DNA
● 最快35分钟即可完成PCR后的核酸纯化
◆案例・应用
去除底物 |
去除底物二聚体 |
去除dNTP |
DNA 纯化 |
测序用 |
酶去除 |
操作时间 |
处理容量 |
◎ |
◎ |
○ |
○100~10,000 bp |
○ |
○ |
最短35分钟 |
与最初样品相同容量 |
操作摘要
与柱色谱法相比
|
DNA Cleaner |
Q公司柱色谱法 |
Step 1 |
添加与 DNA 溶液等量的 DNA Cleaner。 |
向 PCR 样品中添加5倍容量的结合液。此时,若混合物的颜色不为黄色,请添加3M醋酸钠。 |
Step 2 |
在室温下静置10分钟。 |
向离心管中添加 Step 1 的样品。 |
Step 3 |
在室温下离心分离10分钟。 |
在室温下离心分离1分钟。 |
Step 4 |
除去上清液。添加70%乙醇。 |
除去滤液。添加洗涤液。 |
Step 5 |
在室温下离心分离1分钟。 |
在室温下离心分离1分钟。 |
Step 6 |
上清除去。干燥5分钟。 |
除去滤液。 |
Step 7 |
TE Buffer、灭菌水溶解 |
在室温下离心分离10分钟。 |
Step 8 |
FINISH |
添加 50 μL 析出液。静置1分钟。 |
Step 9 |
– |
直接向分离管膜中添加析出液。 |
Step 10 |
– |
在室温下离心分离10分钟。 |
Step 11 |
– |
FINISH |
所需时间 |
约35分钟 |
约10分钟 |
离心分离次数 |
2次 |
4次 |
1) 低分子 DNA(50 bp 以下)的除去
条带1.:DNA Step Ladder(25-500 bp)
条带2.:DNA Step Ladder(25-500 bp)(DNA Cleaner 处理)
条带3.:DNA Step Ladder(25-500 bp)(T 公司Kit)
条带4.:DNA Step Ladder(25-500 bp)(Q 公司Kit)
图1 利用 DNA Cleaner 去除 50 bp 以下的 DNA 片断
使用本品可去除 50 bp 及 25 bp 的 DNA 片断,可回收 75 bp 以上的 DNA 片断。与 Q 公司 Kit 一样,可高效去除 50 bp 以下的 DNA 片断。
2) 高分子 DNA(200 bp 以上)的回收
条带1.:DNA Ladder
条带2.:DNA Ladder (DNA Cleaner 处理)
条带3.:DNA Ladder (T 公司Kit)
条带4.:DNA Ladder (Q 公司Kit)
图2 利用 DNA Cleaner 纯化高分子量 DNA 片断
使用本品可高效回收 200bp 以上的 DNA 片断。
3) 少量 DNA 的回收率比较
[使用DNA]3kb 质粒
[DNA 量检测法]检测 OD260/OD280 吸光度,估算已回收 DNA 的量。
图3 利用 DNA Cleaner 进行质粒 DNA 添加回收实验
使用本品进行100~2,500 ng 的 DNA 回收实验,其结果比 Q 公司 Kit 更高效去除 DNA,对 500 ng 以上的 DNA 回収率达90% 以上。
※操作成本(5 mL)
处理前,核酸溶液的容量关系,请参考:
10 μL → 500 tests
50 μL → 100 tests
100 μL → 50 tests
产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 |
045-30741 | DNA Cleaner 核酸清除剂 |
5 mL | – |
044-30711 | 25bp DNA Step Ladder (25-500bp) | 500 μL(100色带) | – |