外切核酸酶I用于选择性降解混合物中的单链DNA，或在去除PCR后无用的引物。它一般与illustra碱性磷酸酶一起用来使dNTP失去活性，为测序之前PCR除杂提供高质量样品，以便用于DNA测序。

通过核酸外切酶I消化单链DNA释放5´-单磷酸脱氧核糖核苷，保留5´-末端二核苷酸完整。 被磷酰基或乙酰基封闭的末端3´-OH基团的DNA链未被除去。

单位定义

一个单位的酶催化，在37°C下30分钟内释放10 nmol酸溶性核苷酸。